miR-210过表达载体的构建及Northern鉴定

来源 :河北联合大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mfl110
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①目的构建miR-210的过表达载体,为进一步研究miR-210的功能奠定良好的实验基础。②方法首先设计并合成miR-210前体序列的PCR引物,以FIEK293细胞的基因组为模板,PCR扩增包舍有miR-210前体的序列,大小为440bp;PCR产物经过Ec0RJ和BdⅡ酶切后,与线性化的pcDNA3.1(+)载体连接后,转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒。以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48小时后,提取小RNA,Northernbl
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