胱抑素C原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

来源 :解放军医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wallopczp

【摘要】

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目的：构建胱抑素C（cystatin C，Cys-C）原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列，采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列

【作者】

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唐红卫刘一凡孙禅端永艳李迪李绵洋王成彬

【机构】

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解放军总医院临检科,中南大学湘雅医学院医学检验系,深圳康美天鸿有限公司

【出处】

：

解放军医学院学报

【发表日期】

：

2013年10期

【关键词】

：

胱抑素C 基因表达大肠埃希菌镍柱亲和层析 cystatin C gene expression escherichia coli nickel column

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目的：构建胱抑素C（cystatin C，Cys-C）原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列，采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列，经PCR、酶切及测序确认最终获得重组载体pET-30a（＋）-CysC，转化大肠埃希菌Rosetta，通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalac-topyranoside，IPTG）诱导表达、经镍柱亲和层析法纯化获得Cys-C融合蛋白。结果序列分

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