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摘 要：提出了采用乙腈作为溶剂漩涡混合超声提取-气相色谱外标法定量测定地奥司明中甲醇的方法。结果显示，提取方式选择漩涡混合提取5分钟加超声提取20分钟，提取率最高，甲醇浓度在0.05～2 mg/ml呈线性关系，甲醇的定量限为0.0042 mg/ml。在2个标准加入水平下进行回收率和精密度实验，加标回收率均处于98.1%～101.2%之间，相对标准偏差（n=6）小于1.95%。
关键词：地奥司明；甲醇；超声提取；气相色谱法
地奥司明（Diosmin）是一种常用的医药用品，具有对静脉血管系统发挥其活性作用，降低静脉扩张性和静脉血淤带，使毛细血管壁渗透能力正常化并增强其抵抗性[1、2]；还具有治疗急性痔疮发作有关的各种症状[3、4]。地奥司明的提取工艺中经常使用甲醇。然而，甲醇对中枢神经系统有麻醉作用；对视神经和视网膜有特殊选择作用，引起病变；可致代射性酸中毒，食用5～10毫升能双目失明，大量食用会导致死亡。
甲醇残留于地奥司明中不可避免，地奥司明中甲醇含量检测是优化其生产工艺必备的前提条件之一。目前，国内只有药典中有提到地奥司明中甲醇的检测方法，但是其方法中存在很多弊端，本方法采用乙腈作为溶剂，漩涡混合超声提取，气相色谱外标法定量测定地奥司明中甲醇，该法线性范围宽、重复性好、准确度高等优点。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
安捷伦7890A气相色谱仪（带FID检测器）；超声波萃取仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）；漩涡混合器（浙江金坛市金城教学仪器厂）等。
乙腈为优级纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇为优级纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）
地奥司明（市售）
1.2色谱条件
载气为99.99%高纯氮气；色谱柱：DB-WAX （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分离进样口温度为150℃，分流比20：1；检测器温度为200℃；柱流量为4ml/min，柱箱温度条件：初始温度60℃保持3分钟，以20℃/min升温至120℃，保持5分钟。
1.3标准溶液的制备
精密称取甲醇0.5000克至100ml容量瓶中，用乙腈定容，混匀，得5mg/ml甲醇标准储备液。将储备液用乙腈稀释成0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mg/ml的系列标准溶液。
1.4供试品溶液的制备
精密称取地奥司明样品0.5000克，用乙腈作为溶剂，转移至50ml容量瓶中，用乙腈定容，漩涡混合器混合2分钟，超声波超声20分钟，0.45€%em微孔滤膜过滤于进样瓶中，待测。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的优化与选择
2.1.1进样口条件选择
选择进样口温度为120、150、180、200℃时，用10mg/ml标准溶液分别进样5次，结果显示，当进样口温度在120℃和150℃时，峰形及峰面积稳定性较好，当进样口温度在180℃和200℃时，峰形及峰面积稳定性波动较大。实验结果表明，温度越低，实验稳定性越好，主要原因可能是甲醇分子量小，沸点低，本身稳定性较低，当气化温度低时，其膨胀系数相对小些，稳定性就会更好。但是，如果温度太低，供试溶液中其它杂质就无法排除，因此进样口温度选150℃更好。
2.1.2柱箱温度条件选择
当柱箱温度从60℃至120℃之间变化时，甲醇出峰时间一般在1分钟到2分钟之间，温度为60℃时峰形更好，考虑到供试溶液中杂质较多，采用程序升温，最终温度升温至120℃，保持5分钟后再无杂质峰出现。实验结果表明，柱箱温度条件应该为：初始温度60℃保持3分钟，以20℃/min升温至120℃，保持5分钟。
2.2实验条件的选择
2.2.1溶剂的选择
称取样品0.5000g，分别采用水、乙醇、乙腈作为溶剂进行比较实验。其中水作为溶剂时，样品能全部溶解，甲醇的峰拖尾严重，拖尾因子达到1.8，当多次进样后，基线不稳，杂峰增多，主要原因是大分子的地奥司明无法去除，严重污染了进样口。当采用乙醇作为溶剂时，甲醇峰拖尾，拖尾因子达到1.5，而且甲醇与乙醇出峰时间过于靠近，不便于分析。当采用乙腈作为溶剂时，峰形较好，拖尾因子1.2，杂质较少，复合要求分析要求。因此，溶剂选择乙腈。谱图见图1。
2.2.2甲醇的提取方法选择
称取样品0.5000g，采用乙腈作溶剂溶解，分别采用漩涡混合提取5分钟，漩涡混合提取10分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取10分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取15分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取20分钟。检测回收率结果见表1，实验结果标明，单一采用漩涡混合方式，回收率一般只能达到74%，漩涡混合加超声提取效果明显提高，回收率能达到90%以上，当超声时间达到20分钟时，已经基本能够满足检测要求，回收率能达到98.6%。因此，提取方式选择漩涡混合提取5分钟加超声提取20分钟。
将1.3节中所制备的甲醇标准溶液进行分析，以质量浓度（mg/ml）为横坐标X，甲醇锋面积为纵坐标进行线性回归，得甲醇标准曲线Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），结果表明，甲醇浓度在0.05～2 mg/ml内线性关系良好。甲醇的定量限为0.0042 mg/ml。
2.4精密度试验
取一定量的甲醇储备液，用乙腈稀释，得到浓度分别为1、2mg/ml的甲醇标准溶液各5份进行分析，计算得到相对标准偏差（RSD），结果见表2。结果表明，两个浓度的标准溶液的RSD均小于1.95%，符合检测方法要求。
2.5回收试验
称取0.5000g已知甲醇含量的地奥司明样品6份，分别加入质量浓度分别为1、2mg/ml的甲醇标准溶液1ml，每个浓度3份，在2.1和2.2的条件下进行分析，计算回收率，结果见表3。甲醇的回收率均处于98.1%～101.2%之间。
2.7样品分析
称取不同样品8批次，按1.4的方法处理，在2.1的色谱条件下测定，得到各样品的甲醇含量。结果见表4
本方法建立了地奥司明中甲醇的检测方法，具有操作简单、灵敏度高、杂质含量低、回收率良好和稳定性好的优点，用于实际样品的测定，结果满意。
参考文献：
[1]许光友. 地奥司明治疗下肢慢性静脉功能不全临床研究[J].现代中西医结合杂志，2009.1
[2]周璐. 地奥司明[J]医药导报，2007.10
[3]贺平，谢敏江，张桢 地奥司明用于痔外剥内扎术后48例[J]医药导报，2008.9
[4]姚荧 国产地奥司明片治疗痔急性发作20例[J]现代中西医结合杂质，2008.34
作者简介：刘必英，职称：质量工程师，单位：恩施州产品质量监督检验所。
关键词：地奥司明；甲醇；超声提取；气相色谱法
地奥司明（Diosmin）是一种常用的医药用品，具有对静脉血管系统发挥其活性作用，降低静脉扩张性和静脉血淤带，使毛细血管壁渗透能力正常化并增强其抵抗性[1、2]；还具有治疗急性痔疮发作有关的各种症状[3、4]。地奥司明的提取工艺中经常使用甲醇。然而，甲醇对中枢神经系统有麻醉作用；对视神经和视网膜有特殊选择作用，引起病变；可致代射性酸中毒，食用5～10毫升能双目失明，大量食用会导致死亡。
甲醇残留于地奥司明中不可避免，地奥司明中甲醇含量检测是优化其生产工艺必备的前提条件之一。目前，国内只有药典中有提到地奥司明中甲醇的检测方法，但是其方法中存在很多弊端，本方法采用乙腈作为溶剂，漩涡混合超声提取，气相色谱外标法定量测定地奥司明中甲醇，该法线性范围宽、重复性好、准确度高等优点。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
安捷伦7890A气相色谱仪（带FID检测器）；超声波萃取仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）；漩涡混合器（浙江金坛市金城教学仪器厂）等。
乙腈为优级纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇为优级纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）
地奥司明（市售）
1.2色谱条件
载气为99.99%高纯氮气；色谱柱：DB-WAX （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分离进样口温度为150℃，分流比20：1；检测器温度为200℃；柱流量为4ml/min，柱箱温度条件：初始温度60℃保持3分钟，以20℃/min升温至120℃，保持5分钟。
1.3标准溶液的制备
精密称取甲醇0.5000克至100ml容量瓶中，用乙腈定容，混匀，得5mg/ml甲醇标准储备液。将储备液用乙腈稀释成0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mg/ml的系列标准溶液。
1.4供试品溶液的制备
精密称取地奥司明样品0.5000克，用乙腈作为溶剂，转移至50ml容量瓶中，用乙腈定容，漩涡混合器混合2分钟，超声波超声20分钟，0.45€%em微孔滤膜过滤于进样瓶中，待测。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的优化与选择
2.1.1进样口条件选择
选择进样口温度为120、150、180、200℃时，用10mg/ml标准溶液分别进样5次，结果显示，当进样口温度在120℃和150℃时，峰形及峰面积稳定性较好，当进样口温度在180℃和200℃时，峰形及峰面积稳定性波动较大。实验结果表明，温度越低，实验稳定性越好，主要原因可能是甲醇分子量小，沸点低，本身稳定性较低，当气化温度低时，其膨胀系数相对小些，稳定性就会更好。但是，如果温度太低，供试溶液中其它杂质就无法排除，因此进样口温度选150℃更好。
2.1.2柱箱温度条件选择
当柱箱温度从60℃至120℃之间变化时，甲醇出峰时间一般在1分钟到2分钟之间，温度为60℃时峰形更好，考虑到供试溶液中杂质较多，采用程序升温，最终温度升温至120℃，保持5分钟后再无杂质峰出现。实验结果表明，柱箱温度条件应该为：初始温度60℃保持3分钟，以20℃/min升温至120℃，保持5分钟。
2.2实验条件的选择
2.2.1溶剂的选择
称取样品0.5000g，分别采用水、乙醇、乙腈作为溶剂进行比较实验。其中水作为溶剂时，样品能全部溶解，甲醇的峰拖尾严重，拖尾因子达到1.8，当多次进样后，基线不稳，杂峰增多，主要原因是大分子的地奥司明无法去除，严重污染了进样口。当采用乙醇作为溶剂时，甲醇峰拖尾，拖尾因子达到1.5，而且甲醇与乙醇出峰时间过于靠近，不便于分析。当采用乙腈作为溶剂时，峰形较好，拖尾因子1.2，杂质较少，复合要求分析要求。因此，溶剂选择乙腈。谱图见图1。
2.2.2甲醇的提取方法选择
称取样品0.5000g，采用乙腈作溶剂溶解，分别采用漩涡混合提取5分钟，漩涡混合提取10分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取10分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取15分钟，漩涡混合提取5分钟加超声提取20分钟。检测回收率结果见表1，实验结果标明，单一采用漩涡混合方式，回收率一般只能达到74%，漩涡混合加超声提取效果明显提高，回收率能达到90%以上，当超声时间达到20分钟时，已经基本能够满足检测要求，回收率能达到98.6%。因此，提取方式选择漩涡混合提取5分钟加超声提取20分钟。
将1.3节中所制备的甲醇标准溶液进行分析，以质量浓度（mg/ml）为横坐标X，甲醇锋面积为纵坐标进行线性回归，得甲醇标准曲线Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），结果表明，甲醇浓度在0.05～2 mg/ml内线性关系良好。甲醇的定量限为0.0042 mg/ml。
2.4精密度试验
取一定量的甲醇储备液，用乙腈稀释，得到浓度分别为1、2mg/ml的甲醇标准溶液各5份进行分析，计算得到相对标准偏差（RSD），结果见表2。结果表明，两个浓度的标准溶液的RSD均小于1.95%，符合检测方法要求。
2.5回收试验
称取0.5000g已知甲醇含量的地奥司明样品6份，分别加入质量浓度分别为1、2mg/ml的甲醇标准溶液1ml，每个浓度3份，在2.1和2.2的条件下进行分析，计算回收率，结果见表3。甲醇的回收率均处于98.1%～101.2%之间。
2.7样品分析
称取不同样品8批次，按1.4的方法处理，在2.1的色谱条件下测定，得到各样品的甲醇含量。结果见表4
本方法建立了地奥司明中甲醇的检测方法，具有操作简单、灵敏度高、杂质含量低、回收率良好和稳定性好的优点，用于实际样品的测定，结果满意。
参考文献：
[1]许光友. 地奥司明治疗下肢慢性静脉功能不全临床研究[J].现代中西医结合杂志，2009.1
[2]周璐. 地奥司明[J]医药导报，2007.10
[3]贺平，谢敏江，张桢 地奥司明用于痔外剥内扎术后48例[J]医药导报，2008.9
[4]姚荧 国产地奥司明片治疗痔急性发作20例[J]现代中西医结合杂质，2008.34
作者简介：刘必英，职称：质量工程师，单位：恩施州产品质量监督检验所。