【摘 要】
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[目的]建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批.[方法]以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1～F10后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力.PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因,RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性.对F1,F5和F10代ISKNV,SCRV毒种进行细菌,霉菌,支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东广州510380
【出 处】
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西北农林科技大学学报（自然科学版）
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[目的]建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批.[方法]以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1～F10后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力.PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因,RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性.对F1,F5和F10代ISKNV,SCRV毒种进行细菌,霉菌,支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性.分别将F1,F5和F10代ISKNV,SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率(RPS).将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期.[结果]各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为108.58～108.875 TCID50/mL,ISKNV滴度为107.38～107.625 TCID50/mL.F1,F5和F10代ISKNV按104 TCID50/mL,SCRV按106.5 TCID50/mL对鳜鱼攻毒(每尾0.1 mL),致死率均超过90％.ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1 300 bp的MCP基因和1 500 bp的G基因,特异性良好.ISKNV,SCRV毒种无细菌,霉菌,支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染.各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92％以上,SCRV可达84％以上;湿毒-80℃保存,保存期为36个月.[结论]10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验.
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