【摘 要】
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目的建立一种简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法。方法采用严格一致的引物参数,对Fabp5、Ppar-α及β-Actin三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10倍梯
【机 构】
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大连医科大学实验动物中心,大连大学医学院,
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目的建立一种简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法。方法采用严格一致的引物参数,对Fabp5、Ppar-α及β-Actin三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10倍梯度稀释后制作标准曲线。并以这三个标准曲线分别单独定量正常小鼠肝组织、H-ras12V转基因小鼠肝肿瘤周围组织和肿瘤组织中的Fabp5、Ppar-α和β-Actin的表达水平,以β-Actin为内参,分别采用双标准曲线法、2-△△Ct法和单标准曲线法对Fabp5和Ppar-α的表达进行相对定量分析。结果单标准曲线法与双标准曲线法测定的Fabp5和Ppar-α差异性表达的相对定量值没有显著差异,而用2-△△Ct法获得的相对定量值与双标准曲线法相比,波动较大。结论在引物参数严格一致的基础上,单标准曲线法是一种可行、简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法。
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