论文部分内容阅读
摘 要：本实验采用高效液相色谱法对复方青霉素胶囊剂中的氨苄青霉素的进行了含量测定。方法：采用迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相，检测波长为230nm，流速为1.0ml/min。氨苄青霉素在50～800μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。氨苄青霉素平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素的含量测定。关键词：复方青霉素胶囊剂；含量；测定
复方青霉素胶囊剂由氨苄青霉素和邻氯青霉素组成。氨苄青霉素为广谱半合成青霉素，毒性极低，对草绿色链球、溶血性链球菌、肠球菌有较强的抗菌作用。氨苄青霉素主要用于治疗由敏感的金葡菌、溶血性链球菌、淋球菌、百日咳杆菌、流感杆菌、痢疾杆菌等引起的感染性疾病；如胃肠炎及消化道感染（肝、胆感染性疾患、急慢性胃肠炎、菌痢、伤寒及副伤寒等）、呼吸道感染（肺炎、急慢性支气管炎、百日咳等）、泌尿到感染（淋病、尿道炎、膀胱炎等）、软组织感染等。本实验采用高效液相色谱法对复方青霉素胶囊剂中的氨苄青霉素的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ZXTA-20双极反渗透实验室超纯水机（北京卓信博澳仪器有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創业科技有限公司）；HN超声波清洗机加热型（上海汗诺仪器有限公司）；DK-S24电热恒温水浴锅（上海五相仪器仪表有限公司）；STI-501Plus梯度高效液相色谱仪（上海色谱仪器有限公司）；可见分光光度计（扫描型）（石家庄伟天科学仪器设备有限公司）。
1.2 色谱柱：迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：氨苄青霉素
1.4 试剂：三乙胺（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、甲醇（天津市海润莱化工有限公司）、乙腈（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、磷酸（武汉唐氏丰禾化工有限公司）、磷酸二氢钠（武汉唐氏丰禾化工有限公司）、氢氧化钠（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、冰乙酸（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相，检测波长：230nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按氨苄青霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取氨苄青霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
2.4 精密度试验
精密称取氨苄青霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量氨苄青霉素对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，氨苄青霉素在50～800μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的复方青霉素胶囊剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.86%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入氨苄青霉素对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.86%。
2.8 样品稳定性试验
取同一批复方青霉素胶囊剂样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.9 专属性试验
取邻氯青霉素等，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在氨苄青霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定复方青霉素胶囊剂三批样品中氨苄青霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量100.2%、99.9%、99.8%。
3 讨论
分别考察0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7），0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（90∶10），0.05mol/LPH6.5磷酸盐缓冲液-乙晴（6：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（60：40），乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），甲醇-磷酸盐缓冲液（取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量，用氢氧化钠试液调节pH值至6.5）（70：30）不同比例的流动相，结果以0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性好，可用于复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素的含量测定。复方青霉素胶囊剂的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]李阳，王峰，张毕奎，李焕德.不同厂家氨苄西林钠粉针剂的溶解性能及稳定性考察[J].中国现代应用药学，2000（S1）.
[2]张建军，高缘，屠锡德.高效液相色谱法同时测定复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素和邻氯青霉素的含量[J].中国药科大学学报，2000（05）.
[3]谭家风，徐进，卓海通.高效液相色谱法测定舒他西林片中氨苄青霉素的血药浓度及药动学研究[J].中国药科大学学报，1998（05）.
[4]魏立平，姜雄平.重组人白细胞介素-Ⅱ中氨苄青霉素残留量的HPL
C测定[J].中国医药工业杂志，1999（06）.
[5]吴起娟.反相HPLC法测定甲苯磺酸舒他西林中舒他西林及其杂质氨苄青霉素、舒巴克坦的含量[J].广东药学，1997（04）.
复方青霉素胶囊剂由氨苄青霉素和邻氯青霉素组成。氨苄青霉素为广谱半合成青霉素，毒性极低，对草绿色链球、溶血性链球菌、肠球菌有较强的抗菌作用。氨苄青霉素主要用于治疗由敏感的金葡菌、溶血性链球菌、淋球菌、百日咳杆菌、流感杆菌、痢疾杆菌等引起的感染性疾病；如胃肠炎及消化道感染（肝、胆感染性疾患、急慢性胃肠炎、菌痢、伤寒及副伤寒等）、呼吸道感染（肺炎、急慢性支气管炎、百日咳等）、泌尿到感染（淋病、尿道炎、膀胱炎等）、软组织感染等。本实验采用高效液相色谱法对复方青霉素胶囊剂中的氨苄青霉素的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ZXTA-20双极反渗透实验室超纯水机（北京卓信博澳仪器有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創业科技有限公司）；HN超声波清洗机加热型（上海汗诺仪器有限公司）；DK-S24电热恒温水浴锅（上海五相仪器仪表有限公司）；STI-501Plus梯度高效液相色谱仪（上海色谱仪器有限公司）；可见分光光度计（扫描型）（石家庄伟天科学仪器设备有限公司）。
1.2 色谱柱：迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：氨苄青霉素
1.4 试剂：三乙胺（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、甲醇（天津市海润莱化工有限公司）、乙腈（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、磷酸（武汉唐氏丰禾化工有限公司）、磷酸二氢钠（武汉唐氏丰禾化工有限公司）、氢氧化钠（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、冰乙酸（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相，检测波长：230nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按氨苄青霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取氨苄青霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
2.4 精密度试验
精密称取氨苄青霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量氨苄青霉素对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，氨苄青霉素在50～800μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的复方青霉素胶囊剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.86%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入氨苄青霉素对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.86%。
2.8 样品稳定性试验
取同一批复方青霉素胶囊剂样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.9 专属性试验
取邻氯青霉素等，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在氨苄青霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定复方青霉素胶囊剂三批样品中氨苄青霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量100.2%、99.9%、99.8%。
3 讨论
分别考察0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7），0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（90∶10），0.05mol/LPH6.5磷酸盐缓冲液-乙晴（6：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（60：40），乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），甲醇-磷酸盐缓冲液（取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量，用氢氧化钠试液调节pH值至6.5）（70：30）不同比例的流动相，结果以0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.01mol/L磷酸二氢钾-乙腈（93∶7）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性好，可用于复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素的含量测定。复方青霉素胶囊剂的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]李阳，王峰，张毕奎，李焕德.不同厂家氨苄西林钠粉针剂的溶解性能及稳定性考察[J].中国现代应用药学，2000（S1）.
[2]张建军，高缘，屠锡德.高效液相色谱法同时测定复方青霉素胶囊剂中氨苄青霉素和邻氯青霉素的含量[J].中国药科大学学报，2000（05）.
[3]谭家风，徐进，卓海通.高效液相色谱法测定舒他西林片中氨苄青霉素的血药浓度及药动学研究[J].中国药科大学学报，1998（05）.
[4]魏立平，姜雄平.重组人白细胞介素-Ⅱ中氨苄青霉素残留量的HPL
C测定[J].中国医药工业杂志，1999（06）.
[5]吴起娟.反相HPLC法测定甲苯磺酸舒他西林中舒他西林及其杂质氨苄青霉素、舒巴克坦的含量[J].广东药学，1997（04）.