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目的：建立测定血浆和脑脊液中甲氨蝶呤的反相高效液相色谱方法。方法：采用ＯＤＳ不锈钢柱，流动相：甲醇∶０．０２５ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸盐缓冲液（２１∶７９，ｐＨ６．７０），检测波长：３０６ｎｍ，样品经沉淀蛋白质后直接进样。结果：血浆和脑脊液样品回收率分别为９７．５％±４．１％和１００．８％±１．５％，日内和日间误差（ＲＳＤ）均＜７％，最低检测浓度４．７５×１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１，血浆中在１．１０×１０－７～２．２×１０－６ｍｏｌ·Ｌ