目的:建立金丝桃素(Hyp)大鼠血浆浓度的HPLC-荧光测定法并应用于大鼠药动学研究。方法:色谱柱:大连依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6 mm×200 mm),流动相:甲醇-乙腈-1%磷酸盐缓冲液(65∶30∶5),流速1.0mL·min-1,柱温40℃,激发波长315 nm、检测波长590 nm。大鼠(n=6)经静脉给予100μg·kg-1 Hyp并测定血浆药物浓度,DAS2.0软件进行药动分析。结果:Hyp在5～250 ng·mL-1范围内具有良好线性关系,标准曲线为Y=25997 X-77321,r=0.9991。5、25、250ng·ml-1 Hyp日内变异系数(RSD)分别为1.30%、1.00%、1.02%(n=5),日间变异系数(RSD)分别为4.36%、1.23%、2.31%(n=5),回收率分别为71.9%、74.9%、70.4%。静脉给予100μg·kg-1 Hyp,其药动学特征符合二室模型,浓度-时间曲线平缓,药动学参数为AUC0-t)为(224.16±28.78)μg·L-1·h,t1/2为(4.283±2.68)h,CL为(0.196±0.08)L·h-1·kg-1。结论:本试验方法专属性好,灵敏度高,可靠性强,可用于Hyp药动学分析。