【摘 要】
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目的:探讨miR-223抑制β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导海马神经元凋亡的分子机制.方法:体外培养新生SD大鼠的海马神经元,随机分为空白组(不作任何转染处理)、阴性组(转染miR-NC)、miR-223-m组(转染miR-223 mimics)、miR-223-m+LV组(转染miR-223 mimics+慢病毒骨架)、miR-223-m+LV-RhoB组(转染miR-223 mimics+RhoB过表达载体).qRT-PCR和Western blotting检测Aβ1-42诱导的海马神经元中
【机 构】
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东莞市松山湖中心医院 神经内科,广东 东莞 523326;广东医科大学 药学院,广东 东莞 524023
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目的:探讨miR-223抑制β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导海马神经元凋亡的分子机制.方法:体外培养新生SD大鼠的海马神经元,随机分为空白组(不作任何转染处理)、阴性组(转染miR-NC)、miR-223-m组(转染miR-223 mimics)、miR-223-m+LV组(转染miR-223 mimics+慢病毒骨架)、miR-223-m+LV-RhoB组(转染miR-223 mimics+RhoB过表达载体).qRT-PCR和Western blotting检测Aβ1-42诱导的海马神经元中miR-223和RhoB的表达水平;MTT法检测不同浓度Aβ1-42诱导海马神经元的存活率;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测细胞的荧光活性.结果:Aβ1-42可显著抑制海马神经元的存活率,且具有一定的剂量依赖性;同时其可导致海马神经元miR-223相对表达量下降,同时RhoB表达水平升高.选择30μmol·L-1 Aβ1-42寡聚肽片段作用48 h用于后续分组实验.经流式细胞术检测,经Aβ1-4230.0μmol·L-1孵育48 h后,与空白组及阴性组相比,miR-223-m组细胞凋亡率降低;而与miR-223-m组及miR-223-m+LV组相比,miR-223-m+LV-RhoB组细胞凋亡率升高(P<0.05).经Western blotting法检测,与空白组及阴性组相比,miR-223-m组细胞RhoB、Bax和caspase-3蛋白表达降低,同时Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);而与miR-223-m组及miR-223-m+LV组相比,miR-223-m+LV-RhoB组细胞RhoB、Bax和caspase-3蛋白表达升高,同时Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因分析结果显示,miR-223 mimics和野生型RhoB 3′UTR共转染后可抑制荧光素酶活性(P<0.05).结论:miR-223可通过靶向RhoB抑制Aβ1-42诱导的海马神经元细胞凋亡.
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