【摘 要】
：
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,由沙门氏菌引起的食源性疾病位居榜首.荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种准确、可靠的用于核酸定量的扩增技术,常用的荧光探针法使得扩增体系复杂、引物合成成本高.为了简化FQ-PCR的扩增体系,减少标记基团的修饰,拟通过单标记的荧光自淬灭引物实现新型荧光定量聚合酶链式反应(innovative FQ-PCR,IFQ-PCR)用于模板DNA的定量检测.根据沙门氏菌特异
【机 构】
：
华北理工大学公共卫生学院,唐山 063210;中国农业大学营养与健康系,北京 100083;大连民族大学生命科学学院 生物技术与资源利用教育部重点实验室,大连 116600
论文部分内容阅读
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,由沙门氏菌引起的食源性疾病位居榜首.荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种准确、可靠的用于核酸定量的扩增技术,常用的荧光探针法使得扩增体系复杂、引物合成成本高.为了简化FQ-PCR的扩增体系,减少标记基团的修饰,拟通过单标记的荧光自淬灭引物实现新型荧光定量聚合酶链式反应(innovative FQ-PCR,IFQ-PCR)用于模板DNA的定量检测.根据沙门氏菌特异性基因设计单标记发卡型荧光自淬灭引物,并将其应用于FQ-PCR实现了沙门氏菌的检测.设计的自淬灭引物探针一体化,只需单标记,无需额外探针或染料的加入,简化了扩增体系,降低了检测成本;同时引物的发卡结构提高了检测特异性.在最优的引物浓度(0.4μmol/L)下,沙门氏菌在101-105 CFU/mL的浓度范围内其浓度的对数值与循环阈值(cycle threshold,CT)值之间呈现良好的线性关系,R2高达0.99,检测限低至2 CFU/mL,并且在1.5 h内即可完成扩增检测,方法的稳定性符合要求.因此,一种基于荧光自淬灭引物的IFQ-PCR方法被开发出来并实现了沙门氏菌的简便、快速、灵敏、特异、低成本的检测.
其他文献
为了评价双孢蘑菇野生种质资源的营养成分,筛选具有较好或特殊营养成分的种质,为双孢蘑菇育种提供科学的参考依据.以3份主栽品种为对照,分析评价了93份双孢蘑菇野生种质材料的蛋白质、氨基酸和脂肪酸的营养成分含量,并以营养成分含量均高于均值为依据筛选营养高效均衡的种质资源.结果表明,双孢蘑菇野生种质的蛋白质含量为29.50-37.60 g/100g,必需氨基酸含量为4.51-8.89 g/100g,必需氨基酸的比例为24.69％-40.59％,亚油酸含量为4086.55-14190.28 mg/kg,不饱和脂肪酸
鹿茸菇是一种珍贵的食药用真菌,鹿茸菇子实体粗多糖具有抗肿瘤、保肝等多种生理活性.以自由基清除率为指标,分析鹿茸菇多糖的化学抗氧化活性,再以H2O2建立LO2肝细胞损伤模型,进一步研究鹿茸菇子实体多糖对肝细胞氧化应激损伤的改善机制.结果表明:在体外抗氧化方面,鹿茸菇子实体多糖对DPPH、ABTS、OH自由基具有一定的清除能力,其EC50值分别为:0.218 mg/mL、0.027 mg/mL和2.744 mg/mL;在改善肝细胞氧化应激损伤方面,随着多糖浓度升高,细胞存活率也显著提高,当多糖浓度为5 mmo
总分:100分rn时间:90 minrn●请将你的学生代码写入标题页的方框中.rn●使用单独提供的答题纸回答所有问题.rn●不会评估写在试题纸中的答案.rn●旗帜的使用(桌子上的标志),只需将其置于桌子左墙上的旗架上即可.rn●请确保你可使用所有材料和设备.如果遗漏任何东西,请在考试开始后5 min内将旗帜放在旗架上.(15 min后的任何投诉都不会被接受)rn●如遇紧急情况或问题,请将您的黄旗置于旗架上.rn●在实验过程中,任何材料损失都不会额外提供.
旨在研发菌丝含量高、菌丝活力强、萌发点多、松散均一的双孢蘑菇新型颗粒原种.采用单因素和正交试验,以相对菌丝量为指标,考察了颗粒基质配方的C/N、起始pH、含水量和珍珠岩添加量对双孢蘑菇颗粒原种的影响,并优化新型颗粒原种配方;以谷粒原种为对照,通过多项指标比较了新型颗粒原种扩繁栽培种效果.结果表明,双孢蘑菇颗粒基质配方的C/N越小,相对菌丝量越大;珍珠岩添加量越少,相对菌丝量越大;颗粒原种最优配方组合A1B1C3D3,优化配方为菜籽粕78 g,麸皮10 g,粪草发酵料20 g,硅藻岩20 g,珍珠岩5 g、
通过对野生种质群体生长发育性状的表型鉴定和分析,揭示我国特有种类白灵侧耳种质资源的多样性和可利用性.从国家标准菌株库的库藏中随机选择了100个白灵侧耳野生菌株,对其生长发育性状,即PDA培养基平板中的菌丝生长速度、棉籽壳培养料试管中的菌丝长速及原基形成时间等3个性状进行了表型测定和分析.根据性状数据的统计分析发现3个性状均为多基因控制的数量性状,且性状间不具有显著的相关性;菌丝长速性状具有较高的广义遗传力,说明性状的遗传变异主要由基因型决定.来源于不同地区的菌株原基形成所需的时间存在显著性差异,发现来自于
为开发沙漠砂代替土壤作为羊肚菌栽培基质,研究羊肚菌栽培对沙漠砂中微生物群落及基质理化性质的影响.利用扩增子测序分别检测栽培与未栽培羊肚菌的沙漠砂中细菌、真菌群落,解析总有机碳、腐殖质和氮素含量等理化性质.收获子实体产量(1210±259)g/m2鲜重,说明沙漠砂栽培羊肚菌可行.沙漠砂基质中微生物多样性在羊肚菌栽培过程中短暂下降,在羊肚菌出菇采收后回升.真菌群落以子囊菌门为主.随着羊肚菌在沙漠砂中增殖,扫描电镜观察到大量菌丝形成网络状缠绕固定沙漠砂颗粒.细菌群落以变形菌门、放线菌门、拟杆菌门为主.假单胞菌属
维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A.veronii)是一种新型病原体,既能感染鱼类,又可以感染包括人在内的哺乳动物,其致病机理尚不完全清楚.基于A.veronii C4野生型菌株转录组数据一个新的sRNA N155被鉴定,进一步利用同源重组等分子生物学手段构建了sRNA N155的缺失菌株.转录组数据和RT-qPCR分析结果表明,sRNA N155独立转录.序列比对分析发现,sRNA N155具有物种特异性,仅存在于气单胞菌属中.生长曲线测定和运动性实验结果表明,sRNA N155的敲除
为探究茉莉酸在提高植物抗旱性方面发挥的重要作用.对橡胶草外施茉莉酸甲酯(MeJA)处理的转录组进行差异表达谱分析,并筛选克隆出一个受茉莉酸诱导表达显著上调的AP2/EREBP亚家族基因DREB,命名为TkDREB2,对其进行生物信息学分析并转化烟草,进一步对TkDREB2转基因烟草植株在发育期的抗旱性功能鉴定,对转基因烟草进行自然干旱处理,并测定相关生理指标.结果显示在茉莉酸甲酯处理的转录组分析中发现与茉莉酸合成相关的基因和转录因子AP2/EREBP、MYB、MYC、NAC和WRKY的表达水平发生显著变化
探索西藏林芝与山南地区沙棘根瘤及其根际土壤样品中放线菌的多样性及抗菌活性,为天然产物药物研发提供新的微生物资源.采用稀释涂布法对10份样品中可培养放线菌进行分离,后经菌株16S rRNA序列测序,以邻接法(neighbor-joining method,N-J)构建系统发育树分析放线菌种属多样性;利用微孔板法对代表性菌株进行发酵培养及抗菌活性评价;进一步利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)考察活性菌株代谢产物情况.从10份样品中分离到112株放线菌,分属于7个目12科23个属,优势菌属为链霉菌属
银耳胶是一种经简易浸提工艺所制得的新型食品添加剂,主要成分为银耳多糖.本研究制备了两种不同的黄原胶-银耳胶(XG-TFG)和瓜儿豆胶-银耳胶(GG-TFG)的复配胶溶液并分析了两种单胶体(XG、GG)及其复配胶溶液在不同理化条件下的表观黏度和流变学特性,并比较了添加不同比例复配胶酸奶的感官评价.结果表明所有胶体溶液的表观黏度随胶浓度的增加呈现非线性增长;离子种类和浓度对XG-TFG复配胶表观黏度的影响显著小于XG单体胶;此外,复配胶表观黏度在弱酸和弱碱环境中保持稳定,但会在较低加热温度下随加热时间增加而下