人乙醇脱氢酶原核表达载体构建及产物活性测定

来源 :南通大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qinling88
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目的:构建人乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)原核表达载体,在表达菌BL21中进行体外原核表达并测定ADH蛋白的酶学性质。方法:用RT-PCR技术从人肝RNA中克隆ADH开放阅读框架序列,并与表达载体pET-5a连接、转化入宿主菌BL21中,并经培养、筛选、酶切和测序鉴定。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达菌并测定表达蛋白的酶学参数。结果:原核表达载体pET-5a-ADH构建成功;表达蛋白分子量在40 kD左右;酶学测定表明表达蛋白是一种耐酸、耐高温的脱氢酶,
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