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摘要 用ICP-AES法测定茶叶籽中的硒含量，结果表明：茶叶籽最优处理方法为高氯酸和浓硝酸比为1∶4，浸泡时间25 h，电热板起始温度100 ℃，加热时间30 min，每30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。ICP-AES法检出龙井43号茶叶籽含油量高于富硒食用茶油标准，具有好的应用价值。
关键词 茶叶籽；硒；ICP-AES法
中图分类号 TS272；；TS221 文獻标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0280-02
Abetract The selenium content of tea seed by ICP-AES method was made.The results showed that the optimal treatment method of tea seed were the ratio of perchloric acid and concentrated nitric acid was 1∶4， 25 hours soaking time， starting temperature of the electric board was 100 ℃，heating for 30 min，every 30 min increased 10 ℃，to be heated to 140 ℃，every 30 min increased 5 ℃，constant temperature to 150 ℃.ICP-AES method detected tea seed oil content of Longjing 43 was higher than the selenium-enriched of tea oil standard，it had good value.
Key words tea seed；selenium； ICP-AES method
茶[Camellia sinensis（L.）O，Kuntze]为山茶科山茶属植物，常绿乔木或灌木。茶树是叶用植物，主要利用价值是茶叶，茶叶籽作为茶叶生产的副产品，含油率达19.88%，可榨取油脂。我国茶园面积逾200万hm2，若茶叶籽产量以 375 kg/hm2计算，每年可产茶籽75万t，但目前对茶叶籽利用较少，成熟的茶叶籽除繁殖茶树育种材料外，其余大部分被当废弃物腐烂在地里，造成了资源的浪费[1]。我国现主要利用山茶属油茶（Camellia oleifera Abel）作为主要的油料植物。油茶榨取的茶油有“东方橄榄油”之美称[2]。对茶叶籽油及油茶籽油的理化性质及脂肪酸组成分析表明，茶叶籽油与油茶籽油在折光指数、酸值、碘值和皂化值等理化性质上较接近，但茶叶籽必需脂肪酸含量是油茶籽油的2.15倍[3]。茶叶籽油不饱和脂肪酸含量达80%，亚油酸含量20%以上，较油茶籽油高且不含芥酸等难以消化的组分，易于吸收[4]。茶叶籽油特有的茶多酚和VE还可以提高茶油的抗氧化性，保持油品质量[5-6]。2002年，浙江省金华市茗叶茶叶籽综合开发利用研究所生产出的“萃丰”牌高档食用茶叶籽油投放市场受到欢迎[7]。2011年，卫生部将茶叶籽油认定为新资源食品，具有开发应用的巨大潜力[8]。
龙井43是中国农业科学院茶叶研究所从龙井群体中单株选育的国家级良种[9]，现在全国绿茶产区大面积栽种。贵州从20世纪80年代初开始引种龙井43，现种植面积达 1.926万hm2，占全省茶叶总种植面积的7.0%[10]。中国72%的地区有不同程度的缺硒或低硒，其中1/3为严重缺硒区[11]。硒是维持人类机体正常代谢必需的营养元素之一，与人体的健康密切相关[12]，中国茶几乎都含有硒，含量变幅为0.017～6.590 mg/kg。不同产区茶叶含硒量不同，一般非高硒产区绿茶平均含硒量为0.137 1 mg/kg，高硒产区平均为1.492 8 mg/kg[13]。贵州富硒地带集中分布在遵义市、六盘水市、毕节市、黔西南州、黔南州等地[14]，其中贵州开阳土壤硒含量范围为0.12～2.43 mg/kg，均值为0.61 mg/kg[15]，是除湖北恩施、陕西紫阳、安徽石台外，全国又一富硒地带，是贵州省“富硒农产品之乡”，目前已开发出天然富硒米、富硒菜籽油、富硒茶等健康绿色食品[16]。
常见微量硒的测定方法有紫外分光光度法、原子吸收光谱法、发射光谱法、气相色谱法、动力学分析法等[17]。近年来，利用ICP-AES法检测茶叶中的矿物质元素含量的应用也逐渐增多[18-20]，ICP- AES法主要利用高频感应电流产生的高温将反应气加热、电离，利用元素发出的特征谱线进行测定，具有灵敏度高、干扰小、线性宽、可以同时检测多种元素等优点[21]。而对茶叶籽中硒含量的测定还未见公开报道，本研究选取开阳产茶树龙井43号成熟种子，利用ICP-AES技术分析其种子中硒的含量，探索ICP-AES技术测定茶叶籽中硒含量的条件，以为富硒茶叶籽油的开发提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 茶叶籽。龙井43号茶叶籽由贵州泰鸿农业产业开发有限公司提供，为当年采收成熟种子。产地为贵州省开阳县。
1.1.2 试剂。硝酸分析纯，高氯酸分析纯，硫酸分析纯，硒标准容液1 000 μg/mL（国家钢铁材料测试中心）。
1.1.3 仪器与设备。等离子体发射光谱仪 Prodigy7，美国leeman；胜普电热板HT-300，中国广州分析测试中心；氮气发生器；DHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司；粉碎机。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理。①浸泡液配比及时间。将茶叶籽放于电热鼓风干燥箱中，30 ℃条件下连续烘干24 h后，去掉坚硬的外壳，果仁用粉碎机粉碎。称取5份粉碎后的样品30 g于1 000 mL烧杯中，分别加入高氯酸和浓硝酸比为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6的混合溶液600 mL，依次在浸泡10、15、20、25、30 h后抽取混合均匀的样品液 90 mL进行电热板加热试验。②电热板加热温度。一是起始温度100 ℃，保持时间10 min，每10 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每20 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。二是起始温度100 ℃，保持时间20 min，每20 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每20 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。三是起始温度100 ℃，保持时间30 min，每 30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每 30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。 1.2.2 ICP-AES测定硒含量。仪器工作条件为入射功率1 150 W，泵速50 r/min，辅助气0.5 L/min，雾化器流量0.6 L/min，驱气流量一般，垂直观测高度为12 mm，等离子体观测为轴向；硒元素波长选择为196.090 nm。测定不同处理条件下茶叶籽中的硒含量。分析比较得出最优试验方案。
1.2.3 确定最优方案。将茶叶籽去壳烘干粉碎后，分别称取粉碎后的样品3份各1.5 g于50 mL小烧杯中，加入1∶4的高氯酸和浓硝酸30 mL，浸泡25 h。将浸泡过的样品置于电热板上加热，电热板起始温度100 ℃，加热时间30 min，每30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。溶液加热至淡黄色澄清时停止加热，并将剩余溶液定容至25 mL的容量瓶中待测。每个样品连续测量3次。用WPS软件和SPSS19进行数据分析。
2 结果与分析
2.1 茶叶籽油检测方法的科学性分析
2.1.1 不同分组龙井43号茶叶籽中硒的含量比较。用WPS软件对ICP-AES测定的3组茶叶籽中硒含量进行比较，结果见图1。可以看出，3组相同处理检测样品中硒含量数值分布相对水平差异不大，说明试验过程中样品处理方法科学可行，具有可重复性。
2.1.2 样本t检验。以茶叶籽中的硒含量均值0.053 37作为检验值，通过SPSS19软件进行单个样本t检验，置信区间百分比为95 %，得到Sig（双侧）值为0.564>0.05，说明测量值无显著的差异性，测量数据具有较好的稳定性。
2.1.3 单样本Kolmogorov-Smirnov检验。对测量值进行单样本Kolmogorov-Smirnov检验，得到渐近显著性（双侧）sig值0.646>0.05，说明测量数据误差呈现正态分布，更进一步说明了ICP-AES测量的稳定性和一致性。
2.1.4 重复度量分析。将分组检测数据用SPSS19软件进行重复度量分析，置信区间为95%，得到Mauchly 的 W值为0.384，近似卡方值为0.958，Sig值为0.619>0.05，说明检测数据组间没有显著性差异而且具有较大的重合度，由此也说明 ICP-AES测量茶叶籽中硒含量的方法科学可行。
2.2 茶叶籽硒的含量均值计算
通过SPSS19软件进行均值计算，得到开阳产龙井43号茶叶籽中硒含量均值为0.053 37 mg/kg，标准差为0.016 76，均值的标准误为0.005 59。每个测量数据均在食用油富硒标准中规定的硒含量下限0.02 mg/kg以上。 以2009年安康市质量技术监督局的食用油富硒标准中规定的硒含量下限0.02 mg/kg为检验值[22]，说明开阳产龙井43号茶叶籽中硒含量远远高于食用油富硒标准，利用龙井43号茶叶籽生产富硒茶叶籽油是可行的。
3 结论与讨论
基于ICP-AES法测定茶叶籽中的硒含量，结果表明：茶叶籽最优处理方法为高氯酸和浓硝酸比为1∶4，浸泡时间25 h，电热板起始温度100 ℃，加热时间30 min，每30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。ICP-AES法检出龙井43号茶叶籽含油量高于富硒食用茶油标准，具有好的应用价值。
4 参考文献
[1] 马跃青，张正竹.茶叶籽综合利用研究进展[J].中国油脂，2010，35（9）：66-69.
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[3] 恽卓婷，廖鲜艳，翁新楚.茶叶籽油与油茶籽油理化性质及脂肪酸组成比较[J].食品工业科技，2011，32（6）：136-138.
[4] 孙达，凌益春，王岳飞，等.茶叶籽油的加工工艺及其保健功效研究进展[J].茶叶，2010，36（3）：144-147.
[5] 陈德经，冯自立，张辰露.茶叶籽油与油茶籽油的成分比较研究[J].中国油脂，2011，36（3）：69-71.
[6] 歐阳玉祝，石爱华，李佑稷，等.茶多酚对茶籽油过氧化值的影响[J].食品工业科技，2008，29（3）：86-87.
[7] 专家评议审定浙江省金华市“萃丰”茶叶籽油[J].粮油食品科技，2002，10（3）：16.
[8] 梁杏秋，王晓琴，黄兵兵.茶叶籽油组成分析及其抗氧化机理研究进展[J].中国粮油学报， 2013，28（11）：123-128.
[9] 中国农业科学院茶叶研究所.龙井茶新品种：龙井43[J].茶叶科技简报，1987（增刊1）：58-59.
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[11] 布和敖斯尔.土壤硒区域环境分异安全阀值的研究[J].土壤学报，1995，32（2）： 186-193.
[12] WORLD HEALTH ORGANIZATION （WHO）. “Selenium” Environmental Health Criteria 58[M].Geneva：Publications of World Health Organization，1987.
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[14] 贵州天然富硒茶考察研究项目组.贵州天然富硒茶考察研究[J].贵州茶叶，1997（3）：8-10.
[15] 李娟，汪境仁.贵州省开阳县硒资源及其综合开发利用研究[J].贵州农业科学，2003，31（3）：73-74.
[16] 仝双梅，连国奇，秦趣.贵州富硒资源开发利用对策研究[J].湖北农业科学， 2013，52（24）：6023-6025.
[17] 翁蔚，白堃元.中国富硒茶研究现状及其开发利用[J].茶叶，2005，31（1）： 24-27.
[18] 赵立艳，曹婵月，陈贵堂，等.ICP—AES法测定两个等级的三种绿茶中九种矿物质元素含量[J].光谱学与光谱分析， 2011， 31 （4）：1119-1121.
[19] 李海龙，王丽珍，王五一.ICP-AES法测定砖茶中多种生命元素[J].光谱学与光谱分析，2005，25（8）：1344-1346.
[20] 魏新军，南海娟，颜振敏，等. 微波消解 ICP- AES 测定普洱茶中的17种元素[J].光谱实验室，2011，28（6）： 3059-3061.
[21] 杨秀芳，许凌，徐建峰，等.微波消解-电感耦合等离子体发射光谱法测定茶叶中的镉[J].食品科学，2011，32 （18）： 218-220.
[22] 安康市质量技术监督局.食用油富硒标准：DB 6124.01-2010[EB/OL].[2016-03-10].http：//www.docin.com/p-115590378.html.
关键词 茶叶籽；硒；ICP-AES法
中图分类号 TS272；；TS221 文獻标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0280-02
Abetract The selenium content of tea seed by ICP-AES method was made.The results showed that the optimal treatment method of tea seed were the ratio of perchloric acid and concentrated nitric acid was 1∶4， 25 hours soaking time， starting temperature of the electric board was 100 ℃，heating for 30 min，every 30 min increased 10 ℃，to be heated to 140 ℃，every 30 min increased 5 ℃，constant temperature to 150 ℃.ICP-AES method detected tea seed oil content of Longjing 43 was higher than the selenium-enriched of tea oil standard，it had good value.
Key words tea seed；selenium； ICP-AES method
茶[Camellia sinensis（L.）O，Kuntze]为山茶科山茶属植物，常绿乔木或灌木。茶树是叶用植物，主要利用价值是茶叶，茶叶籽作为茶叶生产的副产品，含油率达19.88%，可榨取油脂。我国茶园面积逾200万hm2，若茶叶籽产量以 375 kg/hm2计算，每年可产茶籽75万t，但目前对茶叶籽利用较少，成熟的茶叶籽除繁殖茶树育种材料外，其余大部分被当废弃物腐烂在地里，造成了资源的浪费[1]。我国现主要利用山茶属油茶（Camellia oleifera Abel）作为主要的油料植物。油茶榨取的茶油有“东方橄榄油”之美称[2]。对茶叶籽油及油茶籽油的理化性质及脂肪酸组成分析表明，茶叶籽油与油茶籽油在折光指数、酸值、碘值和皂化值等理化性质上较接近，但茶叶籽必需脂肪酸含量是油茶籽油的2.15倍[3]。茶叶籽油不饱和脂肪酸含量达80%，亚油酸含量20%以上，较油茶籽油高且不含芥酸等难以消化的组分，易于吸收[4]。茶叶籽油特有的茶多酚和VE还可以提高茶油的抗氧化性，保持油品质量[5-6]。2002年，浙江省金华市茗叶茶叶籽综合开发利用研究所生产出的“萃丰”牌高档食用茶叶籽油投放市场受到欢迎[7]。2011年，卫生部将茶叶籽油认定为新资源食品，具有开发应用的巨大潜力[8]。
龙井43是中国农业科学院茶叶研究所从龙井群体中单株选育的国家级良种[9]，现在全国绿茶产区大面积栽种。贵州从20世纪80年代初开始引种龙井43，现种植面积达 1.926万hm2，占全省茶叶总种植面积的7.0%[10]。中国72%的地区有不同程度的缺硒或低硒，其中1/3为严重缺硒区[11]。硒是维持人类机体正常代谢必需的营养元素之一，与人体的健康密切相关[12]，中国茶几乎都含有硒，含量变幅为0.017～6.590 mg/kg。不同产区茶叶含硒量不同，一般非高硒产区绿茶平均含硒量为0.137 1 mg/kg，高硒产区平均为1.492 8 mg/kg[13]。贵州富硒地带集中分布在遵义市、六盘水市、毕节市、黔西南州、黔南州等地[14]，其中贵州开阳土壤硒含量范围为0.12～2.43 mg/kg，均值为0.61 mg/kg[15]，是除湖北恩施、陕西紫阳、安徽石台外，全国又一富硒地带，是贵州省“富硒农产品之乡”，目前已开发出天然富硒米、富硒菜籽油、富硒茶等健康绿色食品[16]。
常见微量硒的测定方法有紫外分光光度法、原子吸收光谱法、发射光谱法、气相色谱法、动力学分析法等[17]。近年来，利用ICP-AES法检测茶叶中的矿物质元素含量的应用也逐渐增多[18-20]，ICP- AES法主要利用高频感应电流产生的高温将反应气加热、电离，利用元素发出的特征谱线进行测定，具有灵敏度高、干扰小、线性宽、可以同时检测多种元素等优点[21]。而对茶叶籽中硒含量的测定还未见公开报道，本研究选取开阳产茶树龙井43号成熟种子，利用ICP-AES技术分析其种子中硒的含量，探索ICP-AES技术测定茶叶籽中硒含量的条件，以为富硒茶叶籽油的开发提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 茶叶籽。龙井43号茶叶籽由贵州泰鸿农业产业开发有限公司提供，为当年采收成熟种子。产地为贵州省开阳县。
1.1.2 试剂。硝酸分析纯，高氯酸分析纯，硫酸分析纯，硒标准容液1 000 μg/mL（国家钢铁材料测试中心）。
1.1.3 仪器与设备。等离子体发射光谱仪 Prodigy7，美国leeman；胜普电热板HT-300，中国广州分析测试中心；氮气发生器；DHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司；粉碎机。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理。①浸泡液配比及时间。将茶叶籽放于电热鼓风干燥箱中，30 ℃条件下连续烘干24 h后，去掉坚硬的外壳，果仁用粉碎机粉碎。称取5份粉碎后的样品30 g于1 000 mL烧杯中，分别加入高氯酸和浓硝酸比为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6的混合溶液600 mL，依次在浸泡10、15、20、25、30 h后抽取混合均匀的样品液 90 mL进行电热板加热试验。②电热板加热温度。一是起始温度100 ℃，保持时间10 min，每10 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每20 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。二是起始温度100 ℃，保持时间20 min，每20 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每20 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。三是起始温度100 ℃，保持时间30 min，每 30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每 30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。 1.2.2 ICP-AES测定硒含量。仪器工作条件为入射功率1 150 W，泵速50 r/min，辅助气0.5 L/min，雾化器流量0.6 L/min，驱气流量一般，垂直观测高度为12 mm，等离子体观测为轴向；硒元素波长选择为196.090 nm。测定不同处理条件下茶叶籽中的硒含量。分析比较得出最优试验方案。
1.2.3 确定最优方案。将茶叶籽去壳烘干粉碎后，分别称取粉碎后的样品3份各1.5 g于50 mL小烧杯中，加入1∶4的高氯酸和浓硝酸30 mL，浸泡25 h。将浸泡过的样品置于电热板上加热，电热板起始温度100 ℃，加热时间30 min，每30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。溶液加热至淡黄色澄清时停止加热，并将剩余溶液定容至25 mL的容量瓶中待测。每个样品连续测量3次。用WPS软件和SPSS19进行数据分析。
2 结果与分析
2.1 茶叶籽油检测方法的科学性分析
2.1.1 不同分组龙井43号茶叶籽中硒的含量比较。用WPS软件对ICP-AES测定的3组茶叶籽中硒含量进行比较，结果见图1。可以看出，3组相同处理检测样品中硒含量数值分布相对水平差异不大，说明试验过程中样品处理方法科学可行，具有可重复性。
2.1.2 样本t检验。以茶叶籽中的硒含量均值0.053 37作为检验值，通过SPSS19软件进行单个样本t检验，置信区间百分比为95 %，得到Sig（双侧）值为0.564>0.05，说明测量值无显著的差异性，测量数据具有较好的稳定性。
2.1.3 单样本Kolmogorov-Smirnov检验。对测量值进行单样本Kolmogorov-Smirnov检验，得到渐近显著性（双侧）sig值0.646>0.05，说明测量数据误差呈现正态分布，更进一步说明了ICP-AES测量的稳定性和一致性。
2.1.4 重复度量分析。将分组检测数据用SPSS19软件进行重复度量分析，置信区间为95%，得到Mauchly 的 W值为0.384，近似卡方值为0.958，Sig值为0.619>0.05，说明检测数据组间没有显著性差异而且具有较大的重合度，由此也说明 ICP-AES测量茶叶籽中硒含量的方法科学可行。
2.2 茶叶籽硒的含量均值计算
通过SPSS19软件进行均值计算，得到开阳产龙井43号茶叶籽中硒含量均值为0.053 37 mg/kg，标准差为0.016 76，均值的标准误为0.005 59。每个测量数据均在食用油富硒标准中规定的硒含量下限0.02 mg/kg以上。 以2009年安康市质量技术监督局的食用油富硒标准中规定的硒含量下限0.02 mg/kg为检验值[22]，说明开阳产龙井43号茶叶籽中硒含量远远高于食用油富硒标准，利用龙井43号茶叶籽生产富硒茶叶籽油是可行的。
3 结论与讨论
基于ICP-AES法测定茶叶籽中的硒含量，结果表明：茶叶籽最优处理方法为高氯酸和浓硝酸比为1∶4，浸泡时间25 h，电热板起始温度100 ℃，加热时间30 min，每30 min升高10 ℃，待升温至140 ℃后，每30 min升高5 ℃，至150 ℃温度恒定不变。ICP-AES法检出龙井43号茶叶籽含油量高于富硒食用茶油标准，具有好的应用价值。
4 参考文献
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[21] 杨秀芳，许凌，徐建峰，等.微波消解-电感耦合等离子体发射光谱法测定茶叶中的镉[J].食品科学，2011，32 （18）： 218-220.
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