人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义

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本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础.提取U937细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,消平cDNA末端,连接EcoRⅠ适配子,磷酸化EcoR Ⅰ适配子5′端;XhoⅠ酶切后,丙烯葡聚糖凝胶-S400柱除去小于400 bp cDNA片段,与λZAP表达载体连接,包装蛋白包装后建成cDNA文库;取出1 μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1-Blue-MRF′,测定文库大小、重组率;随机挑取10个噬斑,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下,释放出
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