【摘 要】
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目的:构建FcyRⅡb基因的真核表达重组质粒pEGFP-FcyRⅡb,并观察其在真核细胞中的表达.方法:以U937细胞的RNA为模板,通过RT-PCR扩增FcyRⅡb基因,并将其定向插入绿色荧光蛋白质
【机 构】
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宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系
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目的:构建FcyRⅡb基因的真核表达重组质粒pEGFP-FcyRⅡb,并观察其在真核细胞中的表达.方法:以U937细胞的RNA为模板,通过RT-PCR扩增FcyRⅡb基因,并将其定向插入绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1中,构建真核表达重组质粒pEGFP-FcyRⅡb.经PCR、限制性核酸内切酶HindⅢ和Sma Ⅰ的酶切鉴定及DNA序列分析后,用脂质体法将pEGFP-FcyRⅡb转染NIH3T3细胞,用荧光显微镜观察pEGFP-FcyRⅡb的表达.结果:扩增出了963bp的FcyRⅡb基因,成功构建了真核表达重组质粒pEGFP-FcyRⅡb.在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pEGFP-FcyRⅡb成功转入NIH3T3细胞,并在NIH3T3细胞中得到了表达.结论:构建的真核重组表达质粒pEGFP-FcyRⅡb能够表达FcyRⅡb蛋白,为进一步研究FcyRⅡb的功能奠定了基础.
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