人酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定方法

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用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)免疫家兔,获得了兔抗haFGF血清。另从含haFGF单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了IgG。用纯化的单抗IgG和多抗血清建立了haFGF的双抗体夹心测定方法,检测水平可达0.25ng/ml。用此方法测定了N端截断型haFGF和牛酸性成纤维细胞生长因子(baFGF),结果显示截断型haFGF的检测灵敏度较低,baFGF更低,提示单克隆抗体的抗原识别部位在haFGF的N端附近。另外,肝素对haFGF的检测有明显的影响,说明单抗的抗原识别部位与肝素的结合部位有关. Rabbits were immunized with purified human acidic fibroblast growth factor (haFGF) to obtain rabbit anti-haFGF serum. IgG was also purified from mouse ascites containing haFGF monoclonal antibody. A double-antibody sandwich assay of haFGF was developed using purified monoclonal antibody IgG and polyclonal antiserum at detection levels up to 0.25 ng / ml. N-terminal truncated haFGF and bFGF were measured by this method. The results showed that the detection sensitivity of truncated haFGF was lower and baFGF was lower, suggesting that the antigen recognition site of monoclonal antibody was near the N-terminal of haFGF . In addition, heparin detection of haFGF have a significant impact, indicating that the antigen recognition site of monoclonal antibody and heparin binding sites.
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