论文部分内容阅读
目的 探究双特异性磷酸酶(DUSP5)对染氟成骨肉瘤细胞成骨活性的影响.方法 体外培养UMR-106细胞,将DUSP5的质粒和小干扰RNA(SiRNA)分别转染至细胞中,再以0、80μmol/L NaF对未转染及转染细胞进行染毒,同时,设转染空载体质粒组(空载组)和干扰RNA对照组(SiNC)培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测成骨标志物COLⅠ、OPN、Runx2 mRNA的表达水平;培养48 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测成骨标志物COLⅠ、OPN、Runx2蛋白的表达水平.结果 qRT-PCR结果显示,与空白对照组相比,NaF组DUSP5的mRNA表达水平明显降低,COLⅠ、OPN、Runx2的mRNA表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与空载组相比,质粒组DUSP5的mRNA表达明显升高,而OPN、Runx2的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),COLⅠ未出现明显改变;与SiNC组相比,SiDUSP5组DUSP5的mRNA表达明显降低,而OPN、Runx2的mRNA表达明显升高(P＜0.05),COLⅠ变化不显著.与质粒组相比,质粒+NaF组的COL Ⅰ、OPN、Runx2 mRNA表达均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与SiDUSP5组相比,SiDUSP5+NaF组的COLⅠ、OPN、Runx2 mRNA表达均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)Western blot结果显示,与空白对照组相比,NaF组的DUSP5的蛋白表达水平明显降低,COLⅠ、OPN、Runx2的蛋白表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与空载组相比,质粒组的DUSP5蛋白表达明显升高,而COLⅠ、OPN、Runx2蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与SiNC组相比,SiDUSP5组的DUSP5蛋白表达明显降低,而OPN、Runx2蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),COLⅠ蛋白表达变化不显著.与质粒组相比,质粒+NaF组的COLⅠ、OPN、Runx2蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与SiDUSP5组相比,SiDUSP5+NaF组的COLⅠ、OPN、Runx2蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DUSP5参与调控染氟成骨肉瘤细胞中成骨活性基因的表达.