【摘 要】
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目的表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体.方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段,将其插入原核表达质粒pQE3
【机 构】
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重庆医科大学微生物学与免疫学教研室
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目的表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体.方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段,将其插入原核表达质粒pQE30,构建重组质粒pQE30-icl.将pQE30-icl转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的基因表达.Western-blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变,但均为无义突变.在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS-PAGE分析约
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