巢式多重等位基因特异性PCR直接检测痰标本结核分枝杆菌耐药性临床应用研究

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目的

应用巢式多重等位基因特异性扩增(nMAS-PCR)检测体系,同步检测结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变,以快速筛查结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。

方法

收集2012年7至8月广州市胸科医院临床疑似肺结核患者165例,留取涂阳晨痰标本,提取结核菌DNA,用n MAS-PCR法同时进行rpoB基因516、526、531位点、katG基因315位点和inh A基因-- 15位点的突变检测,初步判断对利福平与异烟肼的耐药性,并将检测结果与线性探针法比较,采用Kappa检验进行统计学分析。

结果

165份涂阳痰标本中结核分枝杆菌148份,其中利福平敏感株121株,利福平耐药株27株;异烟肼敏感株115株,异烟肼耐药株33株。nMAS-PCR法结果显示利福平及异烟肼敏感株均未见突变,特异度均为100%,而利福平耐药株检测敏感度为78%(21/27),稍低于线性探针法(82%,22/27);异烟肼耐药株检测敏感度为82%(27/33),与线性探针法结果一致(82%,27/33);两种方法对异烟肼与利福平耐药性检测结果比较,Kappa值分别为0.94、0.75。

结论

nMAS-PCR法具有较高的敏感度与特异度,简便经济,能够直接利用结核涂阳痰标本快速筛查多药耐药结核。(中华检验医学杂志,2013,36:1109-1114)

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