【摘 要】
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在对植物进行分子生物学研究时需要提取植物基因组DNA并对其进行PCR克隆，目前实验室常用CTAB法提取植物DNA，但其步骤相对繁琐，需要用有机溶剂反复抽提，在样本较多时，耗时较长。NaOH可以提取多种物种DNA，本研究优化了实验室条件下更加快速、经济、安全、高效的提取植物DNA的方式，主要包括以下步骤：利用液氮快速粉碎植物样品；采用碱裂解（0.5 mol/L NaOH）的方式一步提取DNA；提取的
【机 构】
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青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31972213）； 泰山学者建设资金（tshw20130963）；
论文部分内容阅读
在对植物进行分子生物学研究时需要提取植物基因组DNA并对其进行PCR克隆，目前实验室常用CTAB法提取植物DNA，但其步骤相对繁琐，需要用有机溶剂反复抽提，在样本较多时，耗时较长。NaOH可以提取多种物种DNA，本研究优化了实验室条件下更加快速、经济、安全、高效的提取植物DNA的方式，主要包括以下步骤：利用液氮快速粉碎植物样品；采用碱裂解（0.5 mol/L NaOH）的方式一步提取DNA；提取的DNA利用TE缓冲液进行中和；以中和的粗提DNA作为模板进行PCR反应。本研究利用简单的DNA提取流程并结合PCR检测方式，完成了番茄转化子的快速初步鉴定。同时还证明了该NaOH法可用于番茄不同组织的DNA提取。本研究中整个操作过程步骤简单，耗时短，可在短时间内完成大量植物样品的DNA提取，无需使用氯仿、异丙醇等有毒物质，完成提取时间约为CTAB提取法的1/5，而且提取的不同组织DNA完整性较好，质量可观，满足常规的PCR检测，可用于基因克隆及转化子筛选鉴定，具有一定的利用价值和应用前景。
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