【摘 要】
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优化人组织因子编码序列,利用毕赤酵母表达系统高水平发酵制备重组人组织因子.将人组织因子胞外活性区(hTF219)编码序列进行密码子偏爱性、GC 含量及富AT 区的优化,优化序列
【机 构】
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山东大学附属济南市中心医院医学实验诊断中心,山东济南250013;山东省药学科学院生物药物重点实验室,山东济南250101
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优化人组织因子编码序列,利用毕赤酵母表达系统高水平发酵制备重组人组织因子.将人组织因子胞外活性区(hTF219)编码序列进行密码子偏爱性、GC 含量及富AT 区的优化,优化序列电转入毕赤酵母表达系统;利用博莱霉素(Zeocin)梯度抗性平板筛选出高表达转化子;在1L发酵罐中采用混合碳源连续补料方式发酵制备重组蛋白.替换hTF219编码cDNA 的165 个碱基,获得的优化序列与原始序列的相似性为75％;在Zeocin 浓度为500 μg/mL 的YPD平板上筛选得到高表达转化子tfPP-502,该重组菌株以组成型方式分泌表达重组人组织因子,在1L发酵罐中发酵110 h胞外总蛋白含量为6.27 g/L,目的蛋白占比约80％.在毕赤酵母表达系统中实现了重组人组织因子的高水平发酵制备,获得的重组菌株可用于重组人组织因子的大规模发酵制备.
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