【摘 要】
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利用基因重组技术,对已有载体T7 Select10-3b进行改造,得到被组氨酸标签标记(His-Tag)的新型表达载体,并利用该载体构建cDNA文库,为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的
【机 构】
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河北大学生命科学学院; 健康科学西部大学; 中国21世纪议程管理中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81071795,81272444)
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利用基因重组技术,对已有载体T7 Select10-3b进行改造,得到被组氨酸标签标记(His-Tag)的新型表达载体,并利用该载体构建cDNA文库,为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7 Select10-3b载体为出发材料,将复性得到组氨酸标签表达序列插入其多克隆位点处。再利用包装蛋白包装重组DNA,得到有侵染活性的重组T7噬菌体。用该载体构建乳腺癌cDNA文库,过镍柱,筛选开放阅读框(open reading frame,ORF),计算ORF重组率。测序结果显示该标签已经成功插入,化学发光免疫检测显示该标签在T7中表达。重组T7噬菌体文库的ORF筛选率由筛选前的5.6%提高到82%。T7噬菌体中插入的His标签对提高cDNA文库中ORF的重组率具有重要意义。
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