【摘 要】
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目的建立一种快速、高效的产生腺病毒的实验方法.方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)装在穿梭质粒,线性化后与腺病毒骨架载体一起电穿孔转染大肠杆菌,使之同源重组,产生病毒基因
【机 构】
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华中科技大学同济医学院血液病研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
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目的建立一种快速、高效的产生腺病毒的实验方法.方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)装在穿梭质粒,线性化后与腺病毒骨架载体一起电穿孔转染大肠杆菌,使之同源重组,产生病毒基因组质粒.后Pac酶切,脂质体介导转人293细胞以包装出病毒.扩增后收获病毒,氯化铯密度梯度离心纯化,空斑试验测滴度.结果 52个大肠杆菌克隆,其中有1个发生同源重组,产生腺病毒基因组质粒pAdEGFP,转染293细胞,荧光显微镜下产生绿色荧光.病毒纯化后达1011pfu/m1.结论大肠杆菌内质粒间同源重组的方法可以高效、简便、快捷地产生重
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