【摘 要】
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以质粒pKF3为模板,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段,连至pMD18-T载体,构建得到pMD18-PC.以质粒pQE60-SDH为模板,扩增山梨糖脱氢酶基因sdh
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,西北农林科技大学生命科学学院
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以质粒pKF3为模板,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段,连至pMD18-T载体,构建得到pMD18-PC.以质粒pQE60-SDH为模板,扩增山梨糖脱氢酶基因sdh,与pMD18-PC连接,得到pMD18-PC-SDH.将其用PvuⅡ酶切,回收含ptsG1-cat-sdh-ptsG2的目的片段,电转化至JM109/pKD46,在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与染色体上对应区域发生同源重组,将基因ptsG敲除,替换为cat-sdh基因,获得整合sdh基因的JM1
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