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摘 要 为了建立红颜草莓花瓣离体再生体系，以红颜草莓未开放的花蕾为试验材料，设置不同的TDZ浓度，对红颜草莓愈伤组织及不定芽进行诱导。结果表明：用5%NaClO消毒5 min，置于MS+2.4 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 IBA的培养基上不定芽诱导率达到32%，诱导效果最佳。
关键词 草莓;花瓣;离体再生;体系建立
中图分类号：S668.4 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.23.055
草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）是世界上最美味的水果之一，属蔷薇科、草莓属多年生草本植物[1]。全世界草莓属约24个种，主要分布在亚洲、欧洲和美洲[2]。草莓营养价值极其丰富，被誉为“水果皇后”[3]。草莓染色体的多倍性和高度杂合性，使传统育种受到了育种范围窄、耗时长等限制[4-7]。花瓣离体再生后变异性大，可产生突变体，相对于杂交育种，用花瓣产生突变体，从中选出优良突变体更加节省人力和时间。草莓新品种通生1号便是通过东方草莓花瓣离体再生选育出来的[8]。本试验以红颜草莓花瓣为试验材料，建立红颜花瓣离体再生体系，为利用植物组织培养进行草莓育种奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 植物材料
红颜草莓未开放的花蕾。
1.1.2 培养基及培养条件
试验中所用培养基均加7 g·L-1琼脂、2%蔗糖，pH为5.7～5.8，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min备用。
除暗培养外，所有试验材料培养条件均为16 h（光）/8 h（暗），光强2 000～3 000 lx，温度23～25 ℃。
1.1.3 试剂及采购公司
MS、IBA、TDZ、琼脂、蔗糖等，均购于生工生物工程（上海）股份有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 红颜花瓣消毒处理
选取红颜草莓未开放的花蕾，流水冲洗1 h，无菌水冲洗2～3次，75%酒精30 s，后置于3%、4%、5% NaClO分别处理5 min，迅速倒掉消毒液，无菌水冲洗5～6次，每次浸泡2 min，然后置于已滅菌的滤纸上吸干水分，置于无植物生长调节剂MS培养基上，每个处理3个花蕾，
3次重复，暗培养7 d后统计污染率。
1.2.2 红颜愈伤组织及不定芽诱导
剥掉消毒处理后的红颜花蕾萼片，轻轻撕下花瓣置于愈伤及不定芽诱导培养基：MS+TDZ+0.1 mg·L-1 IBA（TDZ浓度梯度为2.0 mg·L-1、2.4 mg·L-1、2.8 mg·L-1）上暗培养15 d后置于光照下培养15 d统计愈伤发生率，60 d统计不定芽诱导率（每个处理3个重复，14 d换一次培养基）。
1.3 数据统计分析
用Microsoft Excel 2013进行数据分析与图表制作。
2 结果与分析
2.1 消毒液浓度的确定
图1表明，花蕾污染率随NaClO浓度升高而降低，NaClO浓度达到5%时，污染率仅为8%，该浓度下，外植体生长状态良好，存活率高。
2.2 TDZ对红颜花瓣愈伤组织诱导的影响
图2表明，红颜花瓣对TDZ较为敏感，愈伤组织发生率随TDZ浓度的升高而升高，TDZ浓度为2.0 mg·L-1时，愈伤组织发生率高达82%;TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，愈伤诱导率达到100%，无褐化及玻璃化现象;TDZ浓度为2.8 mg·L-1时，愈伤诱导率依旧为100%，此浓度下愈伤组织出现玻璃化现象。
随着TDZ浓度的升高，不定芽诱导率先升高后降低，TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，不定芽诱导率最高，达到32%;TDZ浓度达到2.8 mg·L-1时，发生玻璃化，不定芽诱导率降至11%。
3 讨论
TDZ与IBA配合使用能有效诱导不定芽再生，并能大量增殖丛生芽[9]，使用不同TDZ浓度诱导红颜草莓花瓣愈伤及不定芽，当TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，不定芽诱导率最高，也未出现玻璃化，愈伤组织诱导率达100%，当TDZ浓度升高到2.8 mg·L-1时，愈伤诱导率依旧为100%，但不定芽诱导率显著降低，并出现玻璃化，这与顾地周等[8]在诱导东方草莓花瓣不定芽时所使用的TDZ浓度相近。
4 结论
消毒液浓度越高，污染率越低，用5% NaClO消毒
5 min，消毒效果最佳，外植体生长状态最好。细胞分裂素TDZ可很好地诱导愈伤组织及不定芽，对于红颜花瓣而言：MS+2.4 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 IBA的培养基上不定芽诱导率效果最好，诱导率达到32%。
参考文献：
[1] Johnson AL， Govindarajulu R， Ashman T. Bioclimatic evaluation of geographical range in Fragaria in the world[C].Research Progress of Strawberry（Ⅳ），2015：364-375.
[2] 雷家军，薛莉，代汉萍，等.世界草莓属（Fragaria）植物的种类与分布[A].草莓研究进展（IV）[C].中国园艺学会，2015：12.
[3] 佚名.草莓的价值[J].北方园艺，2016（14）：61.
[4] Galletta J， Maas JL. Strawberry genetics[J]. Hort Science，1990，25（8）：871-879.
[5] Faedi W， MourguesF， Rosati C. Strawberry breeding and varieties： situation and perspectives[J]. Acta Horticulturae，2002，1（567）：51-59.
[6] Folta KM， Davis TM. Strawberry genes and genomics[J]. Critical Reviews in Plant Sciences，2006，25（5）：399-415.
[7] Marta AE， Camadro EL， Díaz-Ricci JC， et al. Breeding barriers between the cultivated strawberry， Fragaria×
ananassa， and related wild germplasm[J].Euphytica，2004，136（2）：139-150.
[8] 顾地周，朱俊义，夏广清，等.草莓新品种‘通生1号’[J].园艺学报，2013，40（6）：1211-1212.
[9] 尹淑萍，金万梅，孟凡红.草莓（Fragaria×ananassa Duch）遗传转化研究进展[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2003（1）：172-176.
（责任编辑：刘昀）
收稿日期：2019-07-18
作者简介：赵映洁（1994—），女，甘肃靖远人，硕士，研究方向为园艺生物工程。
※为通信作者，E-mail： 78526066@qq.com。
关键词 草莓;花瓣;离体再生;体系建立
中图分类号：S668.4 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.23.055
草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）是世界上最美味的水果之一，属蔷薇科、草莓属多年生草本植物[1]。全世界草莓属约24个种，主要分布在亚洲、欧洲和美洲[2]。草莓营养价值极其丰富，被誉为“水果皇后”[3]。草莓染色体的多倍性和高度杂合性，使传统育种受到了育种范围窄、耗时长等限制[4-7]。花瓣离体再生后变异性大，可产生突变体，相对于杂交育种，用花瓣产生突变体，从中选出优良突变体更加节省人力和时间。草莓新品种通生1号便是通过东方草莓花瓣离体再生选育出来的[8]。本试验以红颜草莓花瓣为试验材料，建立红颜花瓣离体再生体系，为利用植物组织培养进行草莓育种奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 植物材料
红颜草莓未开放的花蕾。
1.1.2 培养基及培养条件
试验中所用培养基均加7 g·L-1琼脂、2%蔗糖，pH为5.7～5.8，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min备用。
除暗培养外，所有试验材料培养条件均为16 h（光）/8 h（暗），光强2 000～3 000 lx，温度23～25 ℃。
1.1.3 试剂及采购公司
MS、IBA、TDZ、琼脂、蔗糖等，均购于生工生物工程（上海）股份有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 红颜花瓣消毒处理
选取红颜草莓未开放的花蕾，流水冲洗1 h，无菌水冲洗2～3次，75%酒精30 s，后置于3%、4%、5% NaClO分别处理5 min，迅速倒掉消毒液，无菌水冲洗5～6次，每次浸泡2 min，然后置于已滅菌的滤纸上吸干水分，置于无植物生长调节剂MS培养基上，每个处理3个花蕾，
3次重复，暗培养7 d后统计污染率。
1.2.2 红颜愈伤组织及不定芽诱导
剥掉消毒处理后的红颜花蕾萼片，轻轻撕下花瓣置于愈伤及不定芽诱导培养基：MS+TDZ+0.1 mg·L-1 IBA（TDZ浓度梯度为2.0 mg·L-1、2.4 mg·L-1、2.8 mg·L-1）上暗培养15 d后置于光照下培养15 d统计愈伤发生率，60 d统计不定芽诱导率（每个处理3个重复，14 d换一次培养基）。
1.3 数据统计分析
用Microsoft Excel 2013进行数据分析与图表制作。
2 结果与分析
2.1 消毒液浓度的确定
图1表明，花蕾污染率随NaClO浓度升高而降低，NaClO浓度达到5%时，污染率仅为8%，该浓度下，外植体生长状态良好，存活率高。
2.2 TDZ对红颜花瓣愈伤组织诱导的影响
图2表明，红颜花瓣对TDZ较为敏感，愈伤组织发生率随TDZ浓度的升高而升高，TDZ浓度为2.0 mg·L-1时，愈伤组织发生率高达82%;TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，愈伤诱导率达到100%，无褐化及玻璃化现象;TDZ浓度为2.8 mg·L-1时，愈伤诱导率依旧为100%，此浓度下愈伤组织出现玻璃化现象。
随着TDZ浓度的升高，不定芽诱导率先升高后降低，TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，不定芽诱导率最高，达到32%;TDZ浓度达到2.8 mg·L-1时，发生玻璃化，不定芽诱导率降至11%。
3 讨论
TDZ与IBA配合使用能有效诱导不定芽再生，并能大量增殖丛生芽[9]，使用不同TDZ浓度诱导红颜草莓花瓣愈伤及不定芽，当TDZ浓度达到2.4 mg·L-1时，不定芽诱导率最高，也未出现玻璃化，愈伤组织诱导率达100%，当TDZ浓度升高到2.8 mg·L-1时，愈伤诱导率依旧为100%，但不定芽诱导率显著降低，并出现玻璃化，这与顾地周等[8]在诱导东方草莓花瓣不定芽时所使用的TDZ浓度相近。
4 结论
消毒液浓度越高，污染率越低，用5% NaClO消毒
5 min，消毒效果最佳，外植体生长状态最好。细胞分裂素TDZ可很好地诱导愈伤组织及不定芽，对于红颜花瓣而言：MS+2.4 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 IBA的培养基上不定芽诱导率效果最好，诱导率达到32%。
参考文献：
[1] Johnson AL， Govindarajulu R， Ashman T. Bioclimatic evaluation of geographical range in Fragaria in the world[C].Research Progress of Strawberry（Ⅳ），2015：364-375.
[2] 雷家军，薛莉，代汉萍，等.世界草莓属（Fragaria）植物的种类与分布[A].草莓研究进展（IV）[C].中国园艺学会，2015：12.
[3] 佚名.草莓的价值[J].北方园艺，2016（14）：61.
[4] Galletta J， Maas JL. Strawberry genetics[J]. Hort Science，1990，25（8）：871-879.
[5] Faedi W， MourguesF， Rosati C. Strawberry breeding and varieties： situation and perspectives[J]. Acta Horticulturae，2002，1（567）：51-59.
[6] Folta KM， Davis TM. Strawberry genes and genomics[J]. Critical Reviews in Plant Sciences，2006，25（5）：399-415.
[7] Marta AE， Camadro EL， Díaz-Ricci JC， et al. Breeding barriers between the cultivated strawberry， Fragaria×
ananassa， and related wild germplasm[J].Euphytica，2004，136（2）：139-150.
[8] 顾地周，朱俊义，夏广清，等.草莓新品种‘通生1号’[J].园艺学报，2013，40（6）：1211-1212.
[9] 尹淑萍，金万梅，孟凡红.草莓（Fragaria×ananassa Duch）遗传转化研究进展[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2003（1）：172-176.
（责任编辑：刘昀）
收稿日期：2019-07-18
作者简介：赵映洁（1994—），女，甘肃靖远人，硕士，研究方向为园艺生物工程。
※为通信作者，E-mail： 78526066@qq.com。