【摘 要】
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL (calcineurin B-like protein)与其互作蛋白激酶CIPK(CBL-interacting protein kinase)组成的CBL-CIPK系统,在真核生物钙信号转导及各种胁迫应答途
【机 构】
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宁夏大学农学院,银川750021;宁夏大学食品与葡萄酒学院,银川750021;中国葡萄酒产业技术研究院,银川750021;宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室,银川750021
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL (calcineurin B-like protein)与其互作蛋白激酶CIPK(CBL-interacting protein kinase)组成的CBL-CIPK系统,在真核生物钙信号转导及各种胁迫应答途径中发挥重要作用.采用SMART与LD-PCR技术构建了山葡萄'双丰'(Vitis amurensis Rupr.'Shuangfeng' )叶片组织低温胁迫下的均一化酵母双杂交三框cDNA文库,库容量分别为1.7 × 106、1.3 × 106与1.9 x 106 cfu · mL-1,外源基因插入片段长度约为500～2 000 bp,重组率为100％,符合后续双杂交筛选要求.以本课题组前期鉴定受低温诱导表达、具有核质亚细胞定位的山葡萄VaCIPK18全长(VaCIPK18)、激酶结构域缺失(VaCIPK18△S-TKc)以及NAF结构域缺失(VaCIPK18△NAF)为诱饵,进行酵母双杂交筛选,获得了17个候选互作靶蛋白;从中选取并克隆了7个参与非生物胁迫的候选互作蛋白进行酵母回转验证,仅发现1个ABA信号通路上游信号调节因子VaPYL9与VaCIPK18有互作关系.通过酵母双杂交和双分子荧光互补验证,确定了VaPYL9可与VaCIPK18和VaCIPK18△NAF在酵母中物理互作,而在植物拟南芥原生质体中VaPYL9与VaCIPK18△S-TKc和VaCIPK18△NAF互作,但与全长VaCIPK18不互作.
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