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摘 要：目的 建立气相色谱（GC）测定比阿培南中甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃5种有机残留量的测定方法。方法 采用直接进样毛细管气相色谱法，色谱柱为：DB-624色谱柱（30m×530 m×3.0 m） 载气为氮气，FID检测器，水为溶剂。结果：此色谱条件下被测物均能得到很好的分离，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回收率良好。结论：方法简便、灵敏，结果准确、可靠，适用于雷替曲塞中有机残留量的检测。
关键词：雷替曲塞 有机残留量 毛细管气相色谱法
比阿培南是一种碳青霉烯类合成抗生素；内盐白色或类白色粉末。溶于水，不溶于一般有机溶剂。对肾脱氢肽酶比美洛培南更稳定，不需合用酶抑制剂。抗革兰氏阴性菌，特别是抗绿脓杆菌的活性比亚胺培南强；对需氧性革兰阳性菌的抗菌活性稍低于亚胺培南；抗厌氧菌的活性与亚胺培南相同。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该3种有机溶剂均有残留限量。对于原药中3种有机残留溶剂的色谱分析及残留量的测定尚未见文献报道。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了比阿培南原料药中甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器
Agilent 7890A
2.试药
比阿培南原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件
DB-624（30m×530μm×1.0μm）毛细管柱； 进样口温度为200℃，检测器温度为240℃。程序升温；起始温度35℃，恒温4.5分钟后，以每分钟30℃的升温速度升至150℃，维持5分钟； 分流比：10：1 ； 以水为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
取比阿培南样品0.1g，精密称定，用水1.0ml溶解，作为供试品溶液。
精密称取甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃各适量，加水制成每1ml中分别约含甲醇300μg、丙酮500μg、乙腈41μg、二氯甲烷60μg、四氢呋喃72μg的混合溶液，作为对照品溶液。
3.系统适用性溶液
取水空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈3.4min，丙酮tR≈4.6min，乙腈tR≈4.9min，二氯甲烷tR≈6.2min，四氢呋喃tR≈7.6min，。结果表明，各被测溶剂之间分离度良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃适量，精密称定，用水稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述5种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.1～361.2， 50.2～600.4， 4.10～49.2，6.21～74.5， 7.21～86.5。回归方程及相关系数依次是：
Y1 =0.6104X1 - 1.8120，r1=0.9993；
Y2 =0.5413X2- 1.004， r2=0.9996；
Y3= 0.6217X3 - 0.6154， r3=0.9998。
Y4= 0.5307X3 - 0.1054， r3=0.9996。
Y5= 0.6714X3 - 0.3412， r3=0.9995。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液（每1ml中含甲醇300μg，丙酮500μg，乙腈41μg，二氯甲烷60μg，四氢呋喃72μg，的混合溶液），连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为2.17% ，2.32%，1.65%，1.43%，1.52%。
6.最低检测限
取对照品溶液用水逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃的最低检测限依次是1.5，0.8，2.2，3.1，2.6。
7.回收率实验
取甲醇约0.30g，丙酮约0.50g，乙腈约0.041g，二氯甲烷约0.06g，四氢呋喃约0.072g，精密称定，置已加少许水的10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇约3000μg，丙酮约5000μg，乙腈约410μg，二氯甲烷约600μg，四氢呋喃约720μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的比阿培南约0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为： 101.4%，100.9%，99.6%，100.4%，98.2%，RSD在1.17%～3.07%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定， 3批原料药中检测出甲醇分别为0.010%，0.009%，0.009%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便，灵敏，精密度，回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于雷替曲塞有机溶剂残留量的检测。
关键词：雷替曲塞 有机残留量 毛细管气相色谱法
比阿培南是一种碳青霉烯类合成抗生素；内盐白色或类白色粉末。溶于水，不溶于一般有机溶剂。对肾脱氢肽酶比美洛培南更稳定，不需合用酶抑制剂。抗革兰氏阴性菌，特别是抗绿脓杆菌的活性比亚胺培南强；对需氧性革兰阳性菌的抗菌活性稍低于亚胺培南；抗厌氧菌的活性与亚胺培南相同。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该3种有机溶剂均有残留限量。对于原药中3种有机残留溶剂的色谱分析及残留量的测定尚未见文献报道。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了比阿培南原料药中甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器
Agilent 7890A
2.试药
比阿培南原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件
DB-624（30m×530μm×1.0μm）毛细管柱； 进样口温度为200℃，检测器温度为240℃。程序升温；起始温度35℃，恒温4.5分钟后，以每分钟30℃的升温速度升至150℃，维持5分钟； 分流比：10：1 ； 以水为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
取比阿培南样品0.1g，精密称定，用水1.0ml溶解，作为供试品溶液。
精密称取甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃各适量，加水制成每1ml中分别约含甲醇300μg、丙酮500μg、乙腈41μg、二氯甲烷60μg、四氢呋喃72μg的混合溶液，作为对照品溶液。
3.系统适用性溶液
取水空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈3.4min，丙酮tR≈4.6min，乙腈tR≈4.9min，二氯甲烷tR≈6.2min，四氢呋喃tR≈7.6min，。结果表明，各被测溶剂之间分离度良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃适量，精密称定，用水稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述5种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.1～361.2， 50.2～600.4， 4.10～49.2，6.21～74.5， 7.21～86.5。回归方程及相关系数依次是：
Y1 =0.6104X1 - 1.8120，r1=0.9993；
Y2 =0.5413X2- 1.004， r2=0.9996；
Y3= 0.6217X3 - 0.6154， r3=0.9998。
Y4= 0.5307X3 - 0.1054， r3=0.9996。
Y5= 0.6714X3 - 0.3412， r3=0.9995。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液（每1ml中含甲醇300μg，丙酮500μg，乙腈41μg，二氯甲烷60μg，四氢呋喃72μg，的混合溶液），连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为2.17% ，2.32%，1.65%，1.43%，1.52%。
6.最低检测限
取对照品溶液用水逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃的最低检测限依次是1.5，0.8，2.2，3.1，2.6。
7.回收率实验
取甲醇约0.30g，丙酮约0.50g，乙腈约0.041g，二氯甲烷约0.06g，四氢呋喃约0.072g，精密称定，置已加少许水的10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇约3000μg，丙酮约5000μg，乙腈约410μg，二氯甲烷约600μg，四氢呋喃约720μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的比阿培南约0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为： 101.4%，100.9%，99.6%，100.4%，98.2%，RSD在1.17%～3.07%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定， 3批原料药中检测出甲醇分别为0.010%，0.009%，0.009%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便，灵敏，精密度，回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于雷替曲塞有机溶剂残留量的检测。