寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:klzvms1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL,利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞,并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测。结果表明:ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变,该突变使该位点变为核呼吸因子2(NRF-2)结合位点;经SDS-PAGE电泳显示,pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79,纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白。pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h,转染率在26.4%~41.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株,经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中,获得正常表达。研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构,研究其生物学功能奠定基础。
其他文献
目的分析伏立康唑序贯疗法与常规疗法治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺曲霉菌病的效果。方法选择在普宁市人民医院接受住院治疗的慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺曲霉
为了更好地处理建筑工程质量等级评价过程中的模糊性,本文利用云模型在不确定性转换上的优势,探索了建筑工程质量等级评价一种新方法,并通过工程实例对该方法进行了实证研究
<正>2012年1月13日搜狐首页以《汕尾市委书记谈拆迁:没有天生的刁民只有刁官》这个颇具眼球效应的题目转载了一则郑雁雄采访记。所注明的来源不是这则原标题为《十八大代表、
研究钢制汽车零部件表面电弧喷涂铝涂层的工艺、显微组织及性能。结果表明:采用优化后的电弧喷涂工艺可以获得致密的铝涂层,孔隙率约为火焰喷涂的1/20。涂层的可变形性良好,即使
朱熹是宋代理学的集大成者,也是义理史学的开创者。他将理学的核心观念融入史学中,不仅丰富了传统史学的内容,也深刻影响到中国史学的发展。
2009年9月1日下午,中国铸造协会在上海成功的举办了亚洲铸造论坛预备会。中国铸造协会执行副理事长兼秘书长张立波主持会议。
本文从时间(大众文化为标志的消费时代)、空间(中国本土)、体制(传媒制播体制改革)三个角度分析当前中国电视节目的生存状况,并以电视大片——《中国好声音》为例探究处于上
<正>在小学英语教学中,英语的朗读和听说教学是其中非常重要一部分。英语朗读不仅能够培养学生纯正的语音语调,还能够培养学生良好的英语感,实现英语口语表达能力的提高。英
用相分离法,以PMMA和PS为原料制备出超疏水薄膜。SEM照片表明,薄膜具有鸟巢状多孔微纳米复合微观结构,与水的接触角可达158.1°,表现出良好的超疏水性。文中考查了不同制备条
以互联网技术为基础的农产品溯源体系是优质、安全农产品商业的热点和发展方向。以分析杨凌农产品溯源体系和农产品电子商务发展现状,指出存在的问题,进一步提出了杨凌农产品