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目的:使用嗜热二型内含子基因失活系统(Thermotargetron)失活人肠道来源大肠杆菌(HSM174DE3)β-半乳糖苷酶基因(LacZ),构建lacZ失活突变株.方法:使用分子克隆方法,构建lacZ基因失活质粒pHK-TT1 A-lacZ426a、pHK-TT1A-lacZ1879a、pHK-TT1 A-lacZ1880a及pHK-TT1A-lacZ1155s,将基因失活质粒转化大肠杆菌HSM174菌株(E.coli HSM174),转化子培养时提高温度至48℃,诱导TeI3c/4c二型内含子“归巢”活性,采用蓝白斑及PCR筛选lacZ基因失活突变株.结果:随机挑选20株克隆菌株的PCR结果显示,lacZ426a、lacZ1879a、lacZ1880a及lacZ1155s基因失活效率分别为60％、75％、60％及75％;白斑克隆基因失活效率为100％.结论:Thermotargetron系统可高效的实现E.coli HSM 174菌株lacZ基因失活,并可能具有在中温菌中广泛应用的潜力.