猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因的克隆与表达

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:identitymatrix
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根据GenBank猪圆环病毒2型基因序列,设计合成两对特异性引物,对厦门株.1进行PCR扩增,得到ORF1和ORF2基因。将PCR产物酶切后,插入到pET-22b载体中,构建原核表达载体pET-22b/ORF1、pET-22b/ORF2,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析。确定重组蛋白主要以包涵体的形式表达,包涵体洗涤溶解后,采用Ni^2+离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白,逐步透析法进行复性:Westernblot和ELISA分析结果表明Rep蛋白和Cap蛋
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