【摘 要】
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目的 筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T-B)联合抗原表位.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS-PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况.Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC 11637和SS1株中GroEL分布.Triton X-114法提取上述菌株外膜蛋白样
【机 构】
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310058杭州,浙江大学医学院病原生物学系,310053杭州,浙江医学高等专科学校基础医学部,浙江大学城市学院医学院,310058杭州,浙江大学医学院病原生物学系
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目的 筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T-B)联合抗原表位.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS-PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况.Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC 11637和SS1株中GroEL分布.Triton X-114法提取上述菌株外膜蛋白样本,采用Western blot法检测外膜蛋白样本中的GroEL.采用专业生物信息学软件预测GroEL的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统.采用Western blot法和ELISA分别检测含T-B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T-B联合表位肽的免疫反应性.结果 幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株groEL基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97.68％～99.63％.所构建原核表达系统能有效表达可溶性rGroEL.GroEL定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜.GroEL168、GroEL258、GroEL288、GroEL365、GroEL396和GroEL438六个主要的预测T-B联合抗原表位中,GroEL168显示了很强的阳性杂交信号.ELISA结果显示,GroEL168免疫反应性最强(P＜0.01),其次为GroEL258和GroEL288 (P＜0.05).结论 GroEL是幽门螺杆菌外膜蛋白.GroEL168是GroEL的优势T-B联合抗原表位,可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗。
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