【摘 要】
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为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2, PCV2）诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制，以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象，采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）和实时荧光定量PCR，检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达；合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细
【基金项目】
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国家自然科学基金（32102628）； 中央引导地方科技发展专项项目（2019L3011）； 福建省自然科学基金（2021J01568）； 大学生创新创业训练项目（S202111312033）～～；
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为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2, PCV2）诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制，以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象，采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）和实时荧光定量PCR，检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达；合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞，检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率；采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控；Westernblotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示，感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率，在一定浓度范围内呈剂量依赖性；与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中，miR-125a-5p表达量极显著升高，miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率；利用TargetScan预测发现，miR-125a-5p与Bcl-23′UTR区有结合位点，miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3′UTR-WT荧光素酶活性，对pmir-Bcl-2 3′UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变；外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低，Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高，Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明，PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达，进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达，激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。
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