【摘 要】
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目的 对影响乳腺癌(BRCA)预后的微小RNA(miRNA)进行探索挖掘,并探讨hsa-mir-301b作用机制.方法 使用miRNA抑制剂干扰BRCA细胞中hsa-mir-301b的表达,qRT-PCR检测hsa-mir-301b
【机 构】
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抚顺市第四医院肿瘤内科,辽宁抚顺113123;辽宁省健康产业集团抚矿总医院,辽宁抚顺,113008;中国医科大学药学院药理学教研室,辽宁沈阳110001
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目的 对影响乳腺癌(BRCA)预后的微小RNA(miRNA)进行探索挖掘,并探讨hsa-mir-301b作用机制.方法 使用miRNA抑制剂干扰BRCA细胞中hsa-mir-301b的表达,qRT-PCR检测hsa-mir-301b的表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖能力;miRDB数据库预测hsa-mir-301b靶基因,同时通过GEPIA网站进一步筛选出BRCA中低表达,提示预后不良的候选靶基因2个,应用ENCORI及RNAhybrid在线预测靶基因NR3C2与hsa-mir-301 b的靶向关系;Western blot检测NR3C2蛋白表达水平.结果 与癌旁组织相比,hsa-mir-301b在BRCA组织中显著高表达,且高表达患者预后不良;hsa-mir-301b在乳腺癌细胞系MCF-7细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达(P＜0.0001),抑制hsa-mir-301b表达后,细胞活力下降.NR3C2为hsa-mir-301b的靶基因.NR3C2在BRCA患者组织中低表达,且低表达提示预后不良,并与hsa-mir-301b存在负相关关系;其3'非编码区域与hsa-mir-301b存在结合位点;Western blot实验证明hsa-mir-301b抑制剂能够促进NR3C2蛋白水平表达.结论 hsa-mir-301b在BRCA患者组织中及MCF-7细胞中高表达,发挥癌基因作用,其抑制剂能够减弱BRCA细胞MCF-7的活力,干扰NR3C2的表达.
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