本研究拟通过网络药理学分析、分子对接结合体内实验验证， 探究九味补血口服液对失眠大鼠的睡眠改善机制。利用HPLC-MS/MS分析结合数据库获取九味补血口服液的化学成分及其候选靶标， 并通过蛋白质互作和网络分析， 筛选九味补血口服液治疗失眠的关键网络靶标和潜在活性成分， 进行生物功能富集及通路分析。再采用分子对接技术对上述关键靶标和活性成分进行结合能力预测; 通过对氯苯丙氨酸 （PCPA） 腹腔注射复制大鼠失眠模型， 给予九味补血口服液 (2、4、8 mL·kg-1) 干预7天， 开展戊巴比妥钠阈上剂量诱导睡眠实验， 考察九味补血口服液协同助眠作用。检测海马和下丘脑组织中谷氨酸 （Glu）、γ-氨基丁酸 （GABA） 含量， 比色法检测海马组织中谷氨酸脱羧酶67 （GAD67） 酶活力， qRT-PCR和免疫印迹法检测海马组织中GAD67、γ-氨基丁酸A受体α1 （GABRA1）、γ-氨基丁酸A受体β2 （GABRB2） mRNA和蛋白质表达水平。动物实验经广西壮族自治区中医药研究院实验动物伦理委员会批准 （编号2022060802）。结果表明， 通过构建九味补血口服液中药-成分-失眠疾病靶点网络， 获得该品种治疗失眠的16个关键网络靶标和16个潜在活性成分。网络药理学和分子对接分析显示， 白术内酯III等16个潜在活性成分与GABRA1、GABRB2蛋白质具有潜在的结合能力。在动物实验验证中， 与失眠大鼠模型组相比， 九味补血口服液显著缩短失眠大鼠睡眠潜伏期， 延长睡眠时长， 并明显提高其海马组织中GAD67酶活力及GABA生成量， 以及GAD67、GABAA受体亚基GABRA1、GABRB2的mRNA和蛋白质表达水平， 而降低下丘脑组织中Glu含量， 最终降低下丘脑和海马中Glu/GABA比值， 保持脑内Glu、GABA动态平衡。综上表明， 九味补血口服液可以改善失眠大鼠症状， 促进海马、下丘脑内Glu和GABA平衡， 减轻失眠后脑内兴奋性神经毒性， 其机制可能与增强GAD67表达及酶活力， 促进海马GABAA受体亚基GABRA1、GABRB2介导的抑制性神经活动有关。