【摘 要】
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为研究黄颡鱼STAT3乙酰化位点及其与SIRTs去乙酰化酶家族之间的关系,实验首先构建带Flag标签的STAT3过表达质粒及带HA、GFP标签的SIRTs过表达质粒,并对STAT3可能发生乙酰化的位点进行突变体构建;其次,转染STAT3及突变体和STAT3、SIRTs共转染于HEK293T细胞,利用免疫印迹、免疫沉淀和免疫荧光等技术进行检测.结果显示,STAT3是一种胞浆蛋白.与野生型STAT3相比,突变体K685R的乙酰化水平显著降低.突变体K49R、K87R、K680R、K712R和K714R的乙酰化
【机 构】
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华中农业大学水产学院,湖北武汉 430070
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为研究黄颡鱼STAT3乙酰化位点及其与SIRTs去乙酰化酶家族之间的关系,实验首先构建带Flag标签的STAT3过表达质粒及带HA、GFP标签的SIRTs过表达质粒,并对STAT3可能发生乙酰化的位点进行突变体构建;其次,转染STAT3及突变体和STAT3、SIRTs共转染于HEK293T细胞,利用免疫印迹、免疫沉淀和免疫荧光等技术进行检测.结果显示,STAT3是一种胞浆蛋白.与野生型STAT3相比,突变体K685R的乙酰化水平显著降低.突变体K49R、K87R、K680R、K712R和K714R的乙酰化水平与野生型STAT3无显著差异,表明K685是STAT3的关键乙酰化位点.免疫沉淀和免疫荧光结果显示,SIRT2、SIRT7与STAT3发生蛋白互作并催化STAT3的去乙酰化,而SIRT5不与STAT3发生蛋白互作,对其乙酰化水平无明显影响.本研究揭示了黄颡鱼STAT3的乙酰化位点及STAT3和SIRTs之间的关系,为探讨STAT3蛋白乙酰化修饰在鱼类生理功能中的作用奠定基础.
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