【摘 要】
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目的 探讨靶向纠正Bcl-x基因异常剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移等生物学行为的影响. 方法 人乳腺癌MDA-MB-231细胞和正常NIH3T3细胞均设转染组和空白对照组.实验组采用靶向Bcl-
【机 构】
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南昌市第三医院检验科,江西南昌330009;江西省妇幼保健院检验科;南昌大学第二附属医院检验科;江西省检验医学重点实验室;南昌市东湖区疾病预防控制中心
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目的 探讨靶向纠正Bcl-x基因异常剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移等生物学行为的影响. 方法 人乳腺癌MDA-MB-231细胞和正常NIH3T3细胞均设转染组和空白对照组.实验组采用靶向Bcl-x基因的特异性Vivo-Morpholino Antisense Oligomer (vMO)进行转染,空白对照组常规培养.采用qRT-PCR和Western Blot分别检测各组Bcl-x剪接体Bcl-xL和Bcl-xS mRNA和蛋白表达水平,通过流式细胞仪(FCM)、平板克隆形成试验、Transwell侵袭试验及划痕试验检测vMO对MDA-MB-231和NIH3T3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移的影响. 结果 VMO能稳定高效转染细胞,荧光阳性率达99.17％,并能持续稳定存在7天以上;VMO能在胞内有效调节Bcl-x的剪接模式,MDA-MB-231细胞中Bcl-xL mRNA和蛋白较对照组显著降低,而Bcl-xS mRNA和蛋白较对照组显著升高(P＜0.05);平板克隆形成试验和FCM结果显示,vMO转染前后,NIH3T3细胞克隆形成率分别为43％和35％,凋亡率分别为0.27％和0.53％,差异均无统计学意义;vMO转染MDA-MB-231细胞前后,穿膜细胞数分别为(67±1)和(47±1)个,发生迁移的细胞数分别为(106±2)和(78±1)个,差异具有统计学意义(P＜0.05);划痕试验显示,转染组MDA-MB-231细胞划痕愈合能力较对照组减弱(P＜0.05),平均迁移距离分别为(218±21)mm和(389±12)mm. 结论 vMO靶向结合Bcl-x pre-mR-NA促使Bcl-xL向Bcl-xS转化,在抑制乳腺癌细胞侵袭及转移方面具有重要作用.
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