人参皂苷Rg1促进脂肪干细胞体外增殖与成骨分化

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yfj7874
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目的 观察不同浓度人参皂苷Rg1在体外培养条件下对正常人乳腺脂肪来源干细胞(HBASCs)增殖和成骨分化的影响.方法 体外分离培养HBASCs传至第3代后,按2×104个/孔接种至96孔板,分别加入含10-8、10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L Rg1的成骨诱导培养基中进行培养,分别记为B、C、D、E和F组;另设立对照组,仅加入等量标准成骨诱导培养基,记为A组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测Rg1促进HBASCs的增殖作用并绘制细胞生长增殖曲线.通过碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定细胞ALP活性,放射免疫法检测骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的含量,茜素红染色观察矿化钙化结节形成能力.结果 10-8 mol/L Rg1可有效促进HBASCs增殖;随着Rg1浓度的增加,促细胞增殖活性逐渐增强,Rg1浓度为10-6 mol/L时细胞增殖活性最强,当Rg1浓度增加至10-4 mol/L,则表现为明显的抑制细胞增殖作用.Rg1呈剂量依赖性促进HBASCs中ALP活性、OCN和OPN的表达.培养7d后,A组的ALP活性的表达分别为0.13 ±0.02,其余5组(B、C、D、E和F组)依次为0.32±0.03、0.58±0.06、0.82±0.09、1.04±0.10、1.12±0.11,各实验组与对照组比较,P均<0.05,培养14d后活性进一步提高,A组为0.27±0.03,其余5组依次为0.51±0.05、0.69±0.07、0.95±0.11、1.13±0.13、1.18±0.14,各实验组与对照组比较,P均<0.05.A组在第14天时的OCN及OPN表达量分别为(0.16±0.02) ng/ml和(0.21 ±0.03) ng/ml,其余5组依次为(0.25±0.03) ng/ml及(0.35±0.04) ng/ml、(0.55±0.06) ng/ml及(0.59±0.06) ng/ml、(0.71±0.08) ng/ml及(0.84±0.09) ng/ml、(0.94±0.10) ng/ml及(1.16±0.12) ng/ml、(0.98±0.11) ng/ml及(1.19±0.12) ng/ml;在第21天时A组OCN及OPN表达量分别为(0.21 ±0.03) ng/ml和(0.33±0.04) ng/ml,其余5组依次为(0.44±0.04) ng/ml及(0.57±0.06) ng/ml、(0.73±0.08) ng/ml及(0.76±0.08) ng/ml、(0.92±0.10) ng/ml及(0.97±0.11) ng/ml、(1.05±0.12) ng/ml及(1.28±0.14) ng/ml、(1.07±0.13) ng/ml及(1.32±0.14) ng/ml.较高浓度的Rg1诱导HBASCs钙化结节形成能力较低浓度组更为明显,对照组HBASCs钙化结节形成最少.结论 HBASCs具有成骨分化的能力,可作为组织工程骨构建及骨缺损修复与再生的种子细胞来源之一.Rg1在一定浓度范围内对体外培养条件下的HBASCs具有促生长增殖作用,但在高浓度时Rg1对HBASCs的成骨分化具有显著的促进作用,因此可作为一种良好的成骨诱导因子.
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