【摘 要】
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目的 建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV). 方法 根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物.通过条件优化,建立MERS-
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,吉林长春130122;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;中国农业科学院生物
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目的 建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV). 方法 根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物.通过条件优化,建立MERS-CoV半巢式PCR检测体系,扩增产物测序后与目的序列进行同源比对.以10倍系列稀释重组质粒为标准品,与普通PCR反应进行比较,检测半巢式PCR方法的灵敏度.以其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因为对照,检测半巢式PCR方法的特异性. 结果 使用建立的半巢式PCR方法扩增的特异片段与GenBank中发表的MERS-CoV基因序列同源性为100％;半巢式PCR检测方法的灵敏度为1.17×101拷贝,比普通一轮PCR扩增的灵敏度(1.17×10 5拷贝)提高了104倍;用该方法检测MERS-CoV基因为阳性,其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性. 结论 建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性,为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段.
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