论文部分内容阅读
以GC含量高达74%的带小棒链霉菌(S.clavuligerus)染色体DNA为模板,从引物设计、退火温度、有机辅剂及DNA聚合酶等方面改善PCR反应体系和扩增条件,成功地克隆得到了异青霉素异构酶的cefD基因.改进后的PCR体系中φDMSO=0.05并加入适量的Taq DNA聚合酶,退火温度比常规选择高一些,从而克服了常规PCR法扩增链霉菌基因遇到的二级结构复杂、引物与模板难以配对及引物间和引物内部易形成碱基配对等问题.改进后的PCR法提高了链霉菌基因克隆的效率,也可以广泛应用于高GC含量目的基因的快速