【摘 要】
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目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定.方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆
【机 构】
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第三军医大学大坪医院眼科,第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,澳大利亚Flinders大学人类生理学系神经科学中心
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目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定.方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋白,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western免疫印迹鉴定.结果测序鉴定Nogo-66开放阅读框成功插入pET-46-EK/LIC质粒;重组质粒在大肠杆菌中成功表达大鼠Nogo-66蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量(Mr)
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