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摘要：目的：探索准确高效区分食品中沙门氏菌和弗氏柠檬酸杆菌的方法，以方便两者的分离鉴别。方法：将沙门氏菌和弗氏柠檬酸杆菌分别接种各种分离培养基，观察生长和显色情况，研究沙门氏菌和弗氏柠檬酸杆菌在常规分离培养基营养琼脂、血平板、SS、HE、XLD和科玛嘉沙门显色培养基上的形态特征及生化实验结果，比较分离鉴别效果。结果：沙门氏菌和弗氏柠檬酸杆菌均有产硫化氢现象，SS、HE、XLD琼脂培养基对两者均有一定的鉴别作用，但科玛嘉沙门显色培养基的分离鉴别效果最好。结论：在实际检测工作中，不能以是否产硫化氢作为鉴别沙门氏菌与弗氏枸橼酸杆菌的唯一依据，利用科玛嘉沙门显色培养基可以显著提高监测效率和准确度。
关键词：沙门氏菌;弗氏枸橼酸杆菌;分离培养基;显色培养基;生化反应
沙门氏菌是肠杆菌科中一种重要的人畜共患致病菌，革兰氏阴性，引起沙门氏菌食物中毒最常见的是鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌，同时也可见于其他血清型的沙门氏菌，在世界各地的食物中毒中沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位[1]。因此，沙门氏菌检测已作为食品安全与质量检测的重要指标。
就沙门氏菌的检测方法而言，尽管目前已出现了免疫荧光标记法、酶联免疫吸附法、核酸探针和以分子生物学为基础的PCR法等快速沙门氏菌检测技术，但常规检测方法仍然是目前国内外所普遍采用的标准方法。常规沙门氏菌的检测方法主要包括预增菌，选择性增菌，选择和鉴别性平板分离培养，生化实验和血清学分型鉴定等5个步骤，其中选择性平板分离培养和生化实验又是检测过程中初步分离筛选沙门氏菌的重要环节[2]。虽然沙门氏菌具有一些典型的生化反应特征，如不发酵乳糖和蔗糖，产生硫化氢等，但在实际的检测操作中，往往由于其干扰菌的影响，影响检测人员的判断。文中主要对沙门氏菌及其干扰菌弗氏枸橼酸杆菌在不同选择分离平板上的生长显色情况及生化实验进行了分析研究。
1.材料与方法
1、标准菌株来源：省疾控提供的沙门氏菌标准菌株50761、省质量技术监督局提供的弗氏枸橼酸杆菌018
2、培养基及试剂：营养琼脂、XLD、HE、SS、三糖铁琼脂均由北京路桥公司提供;科玛嘉沙门显色培养基由郑州博赛公司提供;血琼脂平板、API试剂由法国梅里埃公司提供。
3、仪器：电热恒温培养箱（HPX-9272MBE）
4、方法：
4.1培养基配制：沙门氏菌常规分离培养基、显色培养基、生化试验所用培养基及试剂均按商品说明书配制。
4.2试验用标准菌株的接种：将两种标准菌株分别接种于常规分离培养基、显色培养基及生化实验所用培养基，37℃培养24—48小时后观察结果。从分离平板上挑取单个菌落接种于三糖铁琼脂。
2.结果
1.沙门氏菌和弗式枸橼酸杆菌在6种培养基上的生长和显色情况，观察各平板菌落形态，如表1所示
从表中可以看出：血平板、SS、HE、XLD琼脂培养基对于沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌均有一定的鉴别作用，但科玛嘉沙门氏菌的分离鉴别效果最好。
表1 沙门氏菌和弗式枸橼酸杆菌在6种培养基上的生长和显色情况
菌株
营养琼脂
血平板
SS
HE
XLD
沙门显色培养基
沙门氏菌
无色半透明表面光滑湿润的小圆形菌落
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，无溶血环
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落有黑色中心
蓝绿色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落为黑色
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落为黑色
紫红色表面光滑湿润的小圆形菌落
弗氏枸橼酸杆菌
无色透明表面光滑湿润的小圆形菌落
灰色表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，无溶血环
桃红色小圆形菌落，无中心黑色或全黑色菌落
橘黄色小圆形菌落，无中心黑色或全黑色菌落
黄色、扁平大小不一边缘不整齐的菌落
无菌落生长
2.生化反应：沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果判定方法如表2
表2 三糖铁的生化试验结果判定方法
培养基
反应/酶
结果
阴性
阳性
KIA
产酸（如果底部是黄色，斜面是红色，产酸只来源于葡萄糖）
底部红色
底部黄色
KIA
产酸来源于乳糖和/或表面
表面红色
表面黄色
KIA
产气
底部没有气泡
底部有气泡
KIA
产H2S
没有黑色
有黑色
同时以北京威泰科公司的API20E为金标，结果显示：沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的H2S反应均为阳性。
表3 沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果
三糖铁琼脂
斜面
底层
产气
硫化氢
沙门氏菌
K
A
+
+
弗氏枸橼酸杆菌
A
A
+
+
注：K：产碱;A：产酸;+：阳性;—：阴性。
通过比较发现，由于沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌均产H2S，因此，不能以是否产H2S作为鉴别沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的唯一依据。
三、结论
首先，沙门氏菌与其干扰菌弗氏枸橼酸杆菌在选择性培养基血平板、SS、HE、XLD等上的生长和显色情况均有一定的差别，因此可以对两者起到一定的鉴别作用，但可以看出几种选择性培养基中科玛嘉沙门菌显色培养基的结果最为明显。
其次，从沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果比较中可以发现，两者的生化反应有许多相似之处，且H2S反应均为阳性，因此不能以是否产生H2S作为鉴别两者的依据。
综上所述，在实际的检测工作中，一方面同时使用血平板、SS、HE、XLD几种不同的分离鉴别培养基进行鉴定，然后结合生化试验结果进行综合判断，不能以是否产硫化氢作为鉴别沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的唯一依据，另一方面使用科玛嘉沙门显色培养基可以显著提高沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的监测效率和准确度[3]。
参考文献
[1]王章云 肠炎沙门氏菌引起的食物中毒细菌学调查[J].中国人畜共患杂志，1999，15（3）：115
[2]不同沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定.食品研究与开发，2012，33（1）：168
[3]陈茂义，胡婕，刘建昭，等.科玛嘉显色培养基和XLD、SS、HE分离食品中沙门菌效果比较[J].公共卫生与预防医学，20089，19（4）：14
作者简介：王莹莹，本科，检验师，主要从事食源性致病菌检测工作。
关键词：沙门氏菌;弗氏枸橼酸杆菌;分离培养基;显色培养基;生化反应
沙门氏菌是肠杆菌科中一种重要的人畜共患致病菌，革兰氏阴性，引起沙门氏菌食物中毒最常见的是鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌，同时也可见于其他血清型的沙门氏菌，在世界各地的食物中毒中沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位[1]。因此，沙门氏菌检测已作为食品安全与质量检测的重要指标。
就沙门氏菌的检测方法而言，尽管目前已出现了免疫荧光标记法、酶联免疫吸附法、核酸探针和以分子生物学为基础的PCR法等快速沙门氏菌检测技术，但常规检测方法仍然是目前国内外所普遍采用的标准方法。常规沙门氏菌的检测方法主要包括预增菌，选择性增菌，选择和鉴别性平板分离培养，生化实验和血清学分型鉴定等5个步骤，其中选择性平板分离培养和生化实验又是检测过程中初步分离筛选沙门氏菌的重要环节[2]。虽然沙门氏菌具有一些典型的生化反应特征，如不发酵乳糖和蔗糖，产生硫化氢等，但在实际的检测操作中，往往由于其干扰菌的影响，影响检测人员的判断。文中主要对沙门氏菌及其干扰菌弗氏枸橼酸杆菌在不同选择分离平板上的生长显色情况及生化实验进行了分析研究。
1.材料与方法
1、标准菌株来源：省疾控提供的沙门氏菌标准菌株50761、省质量技术监督局提供的弗氏枸橼酸杆菌018
2、培养基及试剂：营养琼脂、XLD、HE、SS、三糖铁琼脂均由北京路桥公司提供;科玛嘉沙门显色培养基由郑州博赛公司提供;血琼脂平板、API试剂由法国梅里埃公司提供。
3、仪器：电热恒温培养箱（HPX-9272MBE）
4、方法：
4.1培养基配制：沙门氏菌常规分离培养基、显色培养基、生化试验所用培养基及试剂均按商品说明书配制。
4.2试验用标准菌株的接种：将两种标准菌株分别接种于常规分离培养基、显色培养基及生化实验所用培养基，37℃培养24—48小时后观察结果。从分离平板上挑取单个菌落接种于三糖铁琼脂。
2.结果
1.沙门氏菌和弗式枸橼酸杆菌在6种培养基上的生长和显色情况，观察各平板菌落形态，如表1所示
从表中可以看出：血平板、SS、HE、XLD琼脂培养基对于沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌均有一定的鉴别作用，但科玛嘉沙门氏菌的分离鉴别效果最好。
表1 沙门氏菌和弗式枸橼酸杆菌在6种培养基上的生长和显色情况
菌株
营养琼脂
血平板
SS
HE
XLD
沙门显色培养基
沙门氏菌
无色半透明表面光滑湿润的小圆形菌落
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，无溶血环
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落有黑色中心
蓝绿色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落为黑色
无色透明表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，产H2S的菌落为黑色
紫红色表面光滑湿润的小圆形菌落
弗氏枸橼酸杆菌
无色透明表面光滑湿润的小圆形菌落
灰色表面光滑湿润边缘整齐的圆形菌落，无溶血环
桃红色小圆形菌落，无中心黑色或全黑色菌落
橘黄色小圆形菌落，无中心黑色或全黑色菌落
黄色、扁平大小不一边缘不整齐的菌落
无菌落生长
2.生化反应：沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果判定方法如表2
表2 三糖铁的生化试验结果判定方法
培养基
反应/酶
结果
阴性
阳性
KIA
产酸（如果底部是黄色，斜面是红色，产酸只来源于葡萄糖）
底部红色
底部黄色
KIA
产酸来源于乳糖和/或表面
表面红色
表面黄色
KIA
产气
底部没有气泡
底部有气泡
KIA
产H2S
没有黑色
有黑色
同时以北京威泰科公司的API20E为金标，结果显示：沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的H2S反应均为阳性。
表3 沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果
三糖铁琼脂
斜面
底层
产气
硫化氢
沙门氏菌
K
A
+
+
弗氏枸橼酸杆菌
A
A
+
+
注：K：产碱;A：产酸;+：阳性;—：阴性。
通过比较发现，由于沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌均产H2S，因此，不能以是否产H2S作为鉴别沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的唯一依据。
三、结论
首先，沙门氏菌与其干扰菌弗氏枸橼酸杆菌在选择性培养基血平板、SS、HE、XLD等上的生长和显色情况均有一定的差别，因此可以对两者起到一定的鉴别作用，但可以看出几种选择性培养基中科玛嘉沙门菌显色培养基的结果最为明显。
其次，从沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的生化试验结果比较中可以发现，两者的生化反应有许多相似之处，且H2S反应均为阳性，因此不能以是否产生H2S作为鉴别两者的依据。
综上所述，在实际的检测工作中，一方面同时使用血平板、SS、HE、XLD几种不同的分离鉴别培养基进行鉴定，然后结合生化试验结果进行综合判断，不能以是否产硫化氢作为鉴别沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的唯一依据，另一方面使用科玛嘉沙门显色培养基可以显著提高沙门氏菌和弗氏枸橼酸杆菌的监测效率和准确度[3]。
参考文献
[1]王章云 肠炎沙门氏菌引起的食物中毒细菌学调查[J].中国人畜共患杂志，1999，15（3）：115
[2]不同沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定.食品研究与开发，2012，33（1）：168
[3]陈茂义，胡婕，刘建昭，等.科玛嘉显色培养基和XLD、SS、HE分离食品中沙门菌效果比较[J].公共卫生与预防医学，20089，19（4）：14
作者简介：王莹莹，本科，检验师，主要从事食源性致病菌检测工作。