目的建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometer,MALDI-TOF MS)快速鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)并自建数据库,进行聚类分型。方法基于MALDI-TOF MS技术,对经全自动微生物分析仪(VITEK2 COMPACT)鉴定为S.aureus的25株分离株和1株标准菌株(ATCC 25923)进行鉴定。并进一步采集26株S.aureus特征性蛋白质指纹图谱,使用flex Analysis软件进行分析,汇总成标准图谱并构建本地分离株S.aureus的鉴定数据库,命名为Staphylococcus aureus。结果经标准菌株ATCC 25923验证,自建数据库对S.aureus鉴定结果的可信度较设备自带数据库明显提高,鉴定分值由2.251提高到了2.845。自建数据库进一步对26株S.aureus进行聚类分型,在差异水平100时,24株不同来源S.aureus被聚类成24个分支,将食品中不同来源分离的S aureus分为24个型。结论 MALDI-TOF MS作为一种快速、准确、高通量的全新微生物鉴定技术,实现了对S.aureus的特异性快速鉴定与分型,能够满足公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面的需求。