水稻紫黄质脱环氧化酶基因的克隆、体外表达及酶促反应

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从水稻中克隆了紫黄质脱环氧化酶(VDE)基因, 其全长Cdna序列为1887 bp, 编码446个氨基酸, 其中转运肽长98个氨基酸. 构建了该基因的原核表达载体Pet-Rvde, 在0.4 mmol/L IPTG的诱导下, 外源蛋白大量表达, 其分子量与天然的VDE蛋白一致, 表达量随诱导时间而增加. Western杂交表明表达蛋白与VDE的多克隆抗体有免疫反应. 将表达蛋白用于紫黄质的脱环氧化反应, 吸收光谱及HPLC分析结果表明, 表达蛋白能在体外催化紫黄质转变成为玉米黄质和环氧玉米黄质.
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