探讨非受体型酪氨酸激酶Tec在LPS诱导巨噬细胞产生TNF–α和IL–1β中的作用和相关机制。
方法按随机数字表法将培养于6孔板的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞分为4组，每组24孔。空白对照组细胞用含体积分数10%FBS的DMEM培养液常规培养2 h；LFM–A13组细胞先用75 μmol/L的Tec特异性抑制剂LFM–A13处理1 h，再同前常规培养1 h；LPS组细胞先同前常规培养1 h，再用0.1 μg/mL LPS刺激1 h；LPS＋LFM–A13组细胞先用75 μmol/L的LFM–A13处理1 h，再用0.1 μg/mL LPS刺激1 h。培养结束后，采用ELISA法测定细胞培养上清液中TNF–α和IL–1β的含量，实时荧光定量RT–PCR法检测细胞内TNF–α和IL–1β mRNA的表达，蛋白质印迹法检测细胞内Tec、转化生长因子激活激酶1(TAK1)和p38 MAPK的活性。对数据行单因素方差分析、LSD检验。
结果LFM–A13组与空白对照组细胞培养上清液中的TNF–α、IL–1β含量相近(P值均大于0.05)，2组细胞内TNF–α、IL–1β mRNA表达量亦相近(P值均大于0.05)。LPS组细胞培养上清液中的TNF–α、IL–1β含量分别为(1 213±154)、(636±90)pg/mL，显著高于空白对照组的(330±44)、(211±31)pg/mL(P值均小于0.01)；其细胞内TNF–α和IL–1β mRNA表达量分别为1.57±0.22、1.44±0.24，显著高于空白对照组的1.00±0.18、1.00±0.19(P值均小于0.01)。LPS＋LFM–A13组细胞培养上清液中的TNF–α、IL–1β含量分别为(787±109)、(453±64)pg/mL，显著低于LPS组(P值均小于0.05)；其细胞内TNF–α和IL–1β mRNA表达量分别为1.21±0.15、1.21±0.22，也显著低于LPS组(P值均小于0.05)。LFM–A13组与空白对照组细胞内Tec、TAK1以及p38 MAPK活性相近(P值均大于0.05)。LPS组细胞内Tec、TAK1、p38 MAPK活性分别为2.69±0.41、3.99±0.65、2.07±0.31，明显高于空白对照组的1.00±0.17、1.00±0.16、1.00±0.18(P值均小于0.01)；LPS＋LFM–A13组细胞内Tec、TAK1和p38 MAPK活性分别为1.02±0.17、1.18±0.20、1.58±0.28，较LPS组显著下降(P<0.05或P<0.01)。
结论Tec通过TAK1—p38 MAPK途径，促进了LPS诱导巨噬细胞促炎性细胞因子TNF–α和IL–1β的产生和释放。