【摘 要】
：
目的 克隆嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)锰超氧化物歧化酶(CtMnSOD)基因,进行毕赤酵母真核表达、纯化重组CtMnSOD蛋白,并分析其酶学性质.方法 提取嗜热毛壳菌总RNA,根
【机 构】
：
泰山医学院化学院,山东泰安,271016;青岛农业大学生命科学院
论文部分内容阅读
目的 克隆嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)锰超氧化物歧化酶(CtMnSOD)基因,进行毕赤酵母真核表达、纯化重组CtMnSOD蛋白,并分析其酶学性质.方法 提取嗜热毛壳菌总RNA,根据CtMnSOD基因全长编码序列(登录号为EF569987)的开放阅读框设计合成引物,并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经双酶切后连接入pPIC9K载体,重组质粒pPIC9K/CtMnSOD经5acⅠ线性化后,采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,并加入甲醇诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物;重组CtMnSOD经硫酸铵沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化;并通过氯化硝基四氮唑蓝(NBT)法测定酶学性质.结果 RT-PCR扩增产物约为684 bp.菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pPIC9K/CtMnSOD构建成功.SDS-PAGE结果显示,经甲醇诱导获得约22.7 kDa的可溶性重组蛋白.酶活力分析结果表明,工程菌酶活力达906.23 U/ml;该重组酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0;在70℃的条件下保温30 min后仍具有71％的酶活力.结论 CtMnSOD在毕赤酵母中高效分泌表达,该酶具有较高的热稳定性,具有较好的工业应用价值.
其他文献
为探讨2001-2013年萍乡市空气质量变化趋势,以该市环境空气日报数据为依据,利用综合污染指数、API指数及Daniel趋势检验法分析2001-2013年空气污染物的季度变化和年度变化.结
目的 研究洪涝灾害对湖南省居民心脑血管疾病日死亡人数的影响.方法 首先采用描述性分析比较洪涝暴露年(2010年)和非暴露年(2009、2011年)心血管类疾病死亡人数的差别,然后选
风湿性心脏瓣膜病是我国常见的一种心脏病,其治疗的主要有效措施是行人工心脏瓣膜置换术,该手术能解除病变瓣膜造成的血流动力障碍,是改善患者心功能最根本的治疗手段.心脏瓣
目的研究济南市极端降水事件对手足口病发病风险的影响,为手足口病的防控工作提供科学依据。方法收集济南市2007年1月1日—2012年12月31日手足口病发病的监测数据及同期济南
目的 建立水中六氯丁二烯的顶空-气相色谱测定法.方法 水中的六氯丁二烯经顶空进样系统提取,采用DB-5毛细管色谱柱以恒温方式进行分离,用带ECD检测器的气相色谱仪进行分析,根
目的研究和评价一种新型快速测定饮用水中硫酸盐的全自动比浊法。方法基于氯化钡比浊法,该方法全自动取样、添加试剂、孵育、检测和处理数据。结果该方法测定范围分别为2~20 mg/L和20~100 mg/L,相关系数≥0.999 4,检出限为0.10 mg/L,日内重复测量的RSD为0.79%~3.2%,自来水加标回收率为98.4%~107%。对硫酸盐质控样品的测定结果均在标准定值范围内,相对误差为-1.
目的 研制大气中9种阴阳离子质控滤膜,为准确分析大气颗粒物样品中阴、阳离子的检测能力提供质量控制保障.方法 使用石英滤膜(18 cm×25 cm)采集3种不同大气污染条件下的大气
目的建立电缆绝缘护套中Cr(Ⅵ)含量的火焰原子吸收光谱测定方法。方法采用干法灰化分解电缆绝缘护套样品,在稀硝酸介质中,采用火焰原子吸收光谱法测定Cr(Ⅵ)含量。结果在0.00
气管、支气管成形术是胸外科难度较大的手术 ,手术病例和手术方式的选择以及手术操作均不易掌握 ,术后并发症的发生率也较高 ,围手术期常需应用纤维支气管镜 (纤支镜 )进行辅
目的探讨孕期暴露于环境中钴、镍、铜、砷、硒对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法于2011年5—10月,在工业区和非工业区随机选择正常孕妇各30人,