【摘 要】
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[目的]探讨小干扰RNA(siRNA)沉默人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)对组织蛋白酶S(CatS)表达的影响.[方法]利用Sigma公司设计合成的以CatS为靶标的siRNA,通过脂质体转染HUVECs.选
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81660240)
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[目的]探讨小干扰RNA(siRNA)沉默人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)对组织蛋白酶S(CatS)表达的影响.[方法]利用Sigma公司设计合成的以CatS为靶标的siRNA,通过脂质体转染HUVECs.选取抑制率最高的siRNA转染HUVECs,分为空白对照组、阴性对照组(siLam)、RNACatS组1(siCatS1)和siRNACatS组2(siCatS2),采用Western Blot法检测CatS、组织蛋白酶K(CatK)、过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷酸化内皮一氧化氮合酶(p-eNOS)及血管内皮细胞增殖因子(VEGF)的表达水平;利用细胞迁移、浸润、增殖实验观察细胞数的变化;采用微管腔形成实验观察微管腔形成数目.[结果] siCatS1,siCatS2组CatS表达水平明显低于空白对照组(P<0.05),而CatK表达水平间差异无统计学意义(P>0.05).PPAR-γ,IRS-2,p-eNOS和VEGF的免疫印迹图和表达水平的定量分析结果显示,与空白对照组比较,siCatS1,siCatS2组PPAR-γ,IRS-2,p-eNOS和VEGF表达水平显著降低(P<0.01),浸润细胞数显著减少(P<0.001),但迁移细胞数间差异无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,siCatS1,siCatS2组增殖细胞数及微管腔形成数目明显减少(P<0.01).[结论] siRNA可显著降低PPARγ,IRS-2,P-eNOS和VEGF的表达,细胞浸润、增殖和微管腔形成减少机制认为可能与PPARγ,IRS-2,P-eNOS和VEGF蛋白表达水平的降低有关系.
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