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摘要 对8个产地收集的多花黄精中多糖、黄酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb、Cd的含量进行比较分析，结果显示，江西宜春的多花黄精多糖含量最高，为14.77%;湖南张家界的多花黄精黄酮及浸出物含量最高，分别为（1.09±0.04）mg/g、74.51%;四川广安的多花黄精多酚含量最高，为（1.45±0.02）mg/g;Cu、Se含量最高的分别为广东清远的多花黄精（1.785 9 μg/g）、江西宜春的多花黄精（77.99 ng/g）;Pb、Cd含量最高的分别为广东清远的多花黄精（2.469 4 μg/g）、广西桂林的多花黄精（0.263 7 μg/g），但均低于国家的限量标准，不存在重金属超标问题。表明不同产地的多花黄精化学成分含量存在一定的差异。
关键词 多花黄精;多糖;黄酮;多酚;浸出物;微量元素
Abstract The contents of polysaccharides， flavonoids， polyphenols， extractums， Cu， Se， Pb and Cd in Polygonatum cyrtonema Hua collected from 8 producing areas were compared and analyzed. The results showed that the content of polysaccharide from Polygonatum cyrtonema Hua in Yichun，Jiangxi Province was the highest， being 14.77%. The content of flavonoids and extractums from Zhangjiajie in Hunan Province was the highest， 1.09 ± 0.04 mg/g and 74.51% respectively.The polyphenol content of Polygonatum cyrtonema Hua in Guang’an， Sichuan Province was the highest， which was 1.45 ± 0.02 mg/g;The highest contents of Cu and Se were Polygonatum cyrtonema Hua from Qingyuan， Guangdong （1.785 9 μg/g） and Yichun， Jiangxi （77.99 ng/g）.The highest contents of Pb and Cd were Polygonatum cyrtonema Hua in Qingyuan， Guangdong （2.469 4 μg/g） and Guilin， Guangxi （0.263 7 μg/g）， respectively， but they were lower than the national limit standards， and there was no problem of excessive heavy metals.The results showed that there were some differences in chemical constituents of Polygonatum cyrtonema Hua from different producing areas.
Key words Polygonatum cyrtonema Hua;Polysaccharide;Flavonoids;Polyphenols;Extracts;Trace elements
黃精为百合科植物的干燥根茎，是我国传统中药，且为药食兼用，2015版《中国药典》将其分为滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）、黄精（Polygonatum sibiricum Red）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）3种[1-2]。我国黄精资源丰富，主要分布在东北部地区、安徽、浙江以及甘肃等地;滇黄精主要分布在贵州、云南以及广西等地;多花黄精主要分布在湖南、湖北、江西以及陕西等地[3]。
黄精主要含有多糖、黄酮类、甾体皂苷类、蒽醌类以及生物碱等化合物，同时还含有挥发油、生物碱、微量元素等成分[4]，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节、降血糖等药理活性[5-7]。研究表明，微量元素在中药药效成分中具有举足轻重的作用，可作为评价中药药效的重要依据之一，重金属元素超标对人体危害极大[8]。该研究通过比较8个产地的多花黄精中黄精多糖、黄酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb及Cd的含量，筛选出品质优良的多花黄精资源，为进一步挖掘多花黄精的药用价值及资源的合理开发提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试材。
从广西、四川、江西、安徽、湖南等省市的8个产地收集多花黄精的新鲜根茎。所收集的样品经宜春学院药学教研室老师鉴定均为多花黄精。洗净、切片，60 ℃烘干，粉碎，过60目筛备用。
1.1.2 试剂。
无水葡萄糖、95%乙醇、蒽酮、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、硫酸，以上试剂均为分析纯;铜、镉、铅、硒离子标准品（国家有色金属及电子材料分析测试中心）;芦丁（中国食品药品检定研究院）;硝酸（优级纯）。
1.1.3 仪器。
752N -紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）;HH-6数显恒温水浴锅（常州金坛良友仪器有限公司）;DHG-9140电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）;CS-1000粉碎机（30～300目、武义海纳电器有限公司）;AL-104型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器公司）;WXJ-Ⅲ型实验室微波消解仪（青岛凯跃环保设备有限公司）;240AA原子吸收分光光度计（安捷伦科技（中国）有限公司）;AFS-230E原子荧光光度计（成都海光仪器有限公司）。 1.2 试验方法
1.2.1 多糖含量测定。
采用蒽酮-硫酸法，以无水葡萄糖作为标准品，参照2015版《中国药典》中黄精多糖含量测定的方法进行测定[1]。测得标准曲线的回归方程为A=0.042 6 C+0.0149，R2=0.999 2（n=6），标准溶液浓度在3.36～20.16 μg/mL 具有线性关系。
1.2.2 黄酮含量测定。
1.2.2.1 芦丁标准曲线的绘制。
采用NaNO2-Al（NO3）3比色法测定黄酮含量，以芦丁为标准品，参照文献[9-10]，并稍作修改，在510 nm处测得标准曲线的回归方程为A=5.133 5C-0.000 9（R2=0.999 5），标准溶液浓度在5.48～27.40 μg/mL具有线性关系。
1.2.2.2 黄酮提取及测定。
参照文献[11]最优方案，并稍作修改。称取一定量的黄精粉末，加入20倍体积的80%乙醇溶液，于70 ℃下反应2 h，提取2次。按照“1.2.2.1”中的测定方法进行黄酮含量的测定并计算含量。
1.2.3 多酚含量测定。
1.2.3.1 没食子酸标准曲线的绘制。
采用福林-酚法测定，参照文献[12-13]，并稍作修改。配制0.5 mg/mL的没食子酸标准溶液，分别移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于1～6号25 mL棕色容量瓶中，分別加入2 mL福林-酚试剂，摇匀，再加入5 mL 7%的碳酸钠溶液并定容，于暗处放置90 min。在765 nm处测定吸光度。测得标准曲线的回归方程为A=0105 5C+0.009 3（R2=0.999 9），标准溶液浓度在0.516～1.548 μg/mL 具有线性关系。
1.2.3.2 多酚提取及测定。
参照文献[14]，并稍作修改，称取一定量的黄精粉末，加入25倍体积的62%乙醇溶液，于超声功率为240 W情况下超声51 min。按照“1.2.3.1”中测定方法进行多酚含量的测定并计算含量。
1.2.4 浸出物含量测定。
根据2015版《中国药典》通则2201醇溶性浸出物测定法中的热浸法测定，用低溶度乙醇作溶剂。
1.2.5 金属元素的测定。
1.2.5.1 仪器工作条件。
利用原子吸收分光光度计测定Cu、Pb、Cd元素含量，仪器参数见表1。原子荧光光度计测定Se元素的含量，仪器参数分别为总电流80 mA、屏蔽气流量800 mL/min、载气流量300 mL/min、原子化器高度8 mm、读数时间10 s-1。
1.2.5.2 标准曲线的制备。
参照文献[15]，按梯度配制各元素的标准溶液，再按“1.2.3.1”中的条件进行标准曲线的绘制，并得到相应的回归方程，各线性回归方程见表2。
1.2.5.3 样品处理及测定。
参照文献[16]，称取一定量各样品粉末于消解罐中，加入6 mL硝酸，混匀后置于120 ℃电热板上预消解30 min，然后置于微波消解仪中进行程序消解，消解完成后再用配套的赶酸装置进行赶酸，用超纯水溶解并定容至25 mL，再按“1.2.3.1”中的条件进行测定。
2 结果与分析
2.1 多糖含量
由表3所示，不同产地的多花黄精多糖含量存在一定差异。江西宜春的多花黄精多糖含量最高，为14.77%，湖南湘西的多花黄精多糖含量最低，为2.66%。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为0.44%、1.15%、1.98%;加标回收率为98.9%，RSD为1.25%。2015版《中国药典》将黄精多糖作为黄精含量测定质量标准，以无水葡萄糖计，不得低于7%[17]。表3中湖南湘西的多花黄精及湖北恩施的多花黄精多糖含量均低于7%，其原因与样品采摘的季节及生长年限有关，不同季节采摘，多糖含量存在一定的差异，生长年限越长黄精多糖含量越高[18-19]。
2.2 黄酮含量
由表3所示，不同产地多花黄精黄酮含量存在一定差异。湖南张家界的多花黄精黄酮含量最高，为（1.09±0.04）mg/g，广西桂林的多花黄精黄酮含量最低，为（0.35±0.02）mg/g。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为0.76%、1.54%、1.36%;加标回收率为95.7%，RSD为1.46%。
2.3 多酚含量
由表3所示，不同产地多花黄精多酚含量存在一定差异。四川广安的多花黄精多酚含量最高，为（1.45±0.02）mg/g，江西宜春的多花黄精多酚含量最低，为（0.47±0.01）mg/g。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为1.02%、1.76%、1.59%;加标回收率为97.4%，RSD为1.03%。
2.4 浸出物含量
由表3所示，不同产地多花黄精浸出物含量存在一定差异。湖南张家界的多花黄精浸出物含量最高，为74.51%，四川广安的多花黄精浸出物含量最低，为57.03%。
2.5 金属元素含量
由表3所示，不同产地多花黄精中的同种元素含量具有一定的差异。Cu、Se含量最高的分别为广东清远的多花黄精（1.785 9 μg/g）、江西宜春的多花黄精（77.99 ng/g）;Pb、Cd含量最高的分别为广东清远的多花黄精（2.469 4 μg/g）、广西桂林的多花黄精（0.263 7 μg/g），但均低于国家的限量标准，不存在重金属超标问题。微量元素含量存在差异与当地土壤环境有关，江西宜春、湖北恩施均是以富硒享誉全国，所以江西宜春的多花黄精及湖北恩施的多花黄精中Se含量高于其他产地的多花黄精。 利用加标回收试验来评价试验结果的准确度，结果见表4。由表4可知，试验加标回收率为95.8%～102.6%，RSD为1.7%～2.3%，表明试验方法准确性高。
3 结论
不同产地的多花黄精中多糖、黄酮、多酚、浸出物以及金属元素含量存在差异，与所处的地理环境、采收季节、生长年限等因素存在一定的关系。以多糖、Se含量为评价指标，则江西宜春的多花黄精为最优;以黄酮、浸出物为评价指标，则湖南张家界的多花黄精为最优;以多酚含量为评价指标，则四川广安的多花黄精为最优。由此可知，评价中药材质量不能从单一的化学成分，需要综合多种化学成分来考虑。
参考文献
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关键词 多花黄精;多糖;黄酮;多酚;浸出物;微量元素
Abstract The contents of polysaccharides， flavonoids， polyphenols， extractums， Cu， Se， Pb and Cd in Polygonatum cyrtonema Hua collected from 8 producing areas were compared and analyzed. The results showed that the content of polysaccharide from Polygonatum cyrtonema Hua in Yichun，Jiangxi Province was the highest， being 14.77%. The content of flavonoids and extractums from Zhangjiajie in Hunan Province was the highest， 1.09 ± 0.04 mg/g and 74.51% respectively.The polyphenol content of Polygonatum cyrtonema Hua in Guang’an， Sichuan Province was the highest， which was 1.45 ± 0.02 mg/g;The highest contents of Cu and Se were Polygonatum cyrtonema Hua from Qingyuan， Guangdong （1.785 9 μg/g） and Yichun， Jiangxi （77.99 ng/g）.The highest contents of Pb and Cd were Polygonatum cyrtonema Hua in Qingyuan， Guangdong （2.469 4 μg/g） and Guilin， Guangxi （0.263 7 μg/g）， respectively， but they were lower than the national limit standards， and there was no problem of excessive heavy metals.The results showed that there were some differences in chemical constituents of Polygonatum cyrtonema Hua from different producing areas.
Key words Polygonatum cyrtonema Hua;Polysaccharide;Flavonoids;Polyphenols;Extracts;Trace elements
黃精为百合科植物的干燥根茎，是我国传统中药，且为药食兼用，2015版《中国药典》将其分为滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）、黄精（Polygonatum sibiricum Red）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）3种[1-2]。我国黄精资源丰富，主要分布在东北部地区、安徽、浙江以及甘肃等地;滇黄精主要分布在贵州、云南以及广西等地;多花黄精主要分布在湖南、湖北、江西以及陕西等地[3]。
黄精主要含有多糖、黄酮类、甾体皂苷类、蒽醌类以及生物碱等化合物，同时还含有挥发油、生物碱、微量元素等成分[4]，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节、降血糖等药理活性[5-7]。研究表明，微量元素在中药药效成分中具有举足轻重的作用，可作为评价中药药效的重要依据之一，重金属元素超标对人体危害极大[8]。该研究通过比较8个产地的多花黄精中黄精多糖、黄酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb及Cd的含量，筛选出品质优良的多花黄精资源，为进一步挖掘多花黄精的药用价值及资源的合理开发提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试材。
从广西、四川、江西、安徽、湖南等省市的8个产地收集多花黄精的新鲜根茎。所收集的样品经宜春学院药学教研室老师鉴定均为多花黄精。洗净、切片，60 ℃烘干，粉碎，过60目筛备用。
1.1.2 试剂。
无水葡萄糖、95%乙醇、蒽酮、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、硫酸，以上试剂均为分析纯;铜、镉、铅、硒离子标准品（国家有色金属及电子材料分析测试中心）;芦丁（中国食品药品检定研究院）;硝酸（优级纯）。
1.1.3 仪器。
752N -紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）;HH-6数显恒温水浴锅（常州金坛良友仪器有限公司）;DHG-9140电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）;CS-1000粉碎机（30～300目、武义海纳电器有限公司）;AL-104型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器公司）;WXJ-Ⅲ型实验室微波消解仪（青岛凯跃环保设备有限公司）;240AA原子吸收分光光度计（安捷伦科技（中国）有限公司）;AFS-230E原子荧光光度计（成都海光仪器有限公司）。 1.2 试验方法
1.2.1 多糖含量测定。
采用蒽酮-硫酸法，以无水葡萄糖作为标准品，参照2015版《中国药典》中黄精多糖含量测定的方法进行测定[1]。测得标准曲线的回归方程为A=0.042 6 C+0.0149，R2=0.999 2（n=6），标准溶液浓度在3.36～20.16 μg/mL 具有线性关系。
1.2.2 黄酮含量测定。
1.2.2.1 芦丁标准曲线的绘制。
采用NaNO2-Al（NO3）3比色法测定黄酮含量，以芦丁为标准品，参照文献[9-10]，并稍作修改，在510 nm处测得标准曲线的回归方程为A=5.133 5C-0.000 9（R2=0.999 5），标准溶液浓度在5.48～27.40 μg/mL具有线性关系。
1.2.2.2 黄酮提取及测定。
参照文献[11]最优方案，并稍作修改。称取一定量的黄精粉末，加入20倍体积的80%乙醇溶液，于70 ℃下反应2 h，提取2次。按照“1.2.2.1”中的测定方法进行黄酮含量的测定并计算含量。
1.2.3 多酚含量测定。
1.2.3.1 没食子酸标准曲线的绘制。
采用福林-酚法测定，参照文献[12-13]，并稍作修改。配制0.5 mg/mL的没食子酸标准溶液，分别移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于1～6号25 mL棕色容量瓶中，分別加入2 mL福林-酚试剂，摇匀，再加入5 mL 7%的碳酸钠溶液并定容，于暗处放置90 min。在765 nm处测定吸光度。测得标准曲线的回归方程为A=0105 5C+0.009 3（R2=0.999 9），标准溶液浓度在0.516～1.548 μg/mL 具有线性关系。
1.2.3.2 多酚提取及测定。
参照文献[14]，并稍作修改，称取一定量的黄精粉末，加入25倍体积的62%乙醇溶液，于超声功率为240 W情况下超声51 min。按照“1.2.3.1”中测定方法进行多酚含量的测定并计算含量。
1.2.4 浸出物含量测定。
根据2015版《中国药典》通则2201醇溶性浸出物测定法中的热浸法测定，用低溶度乙醇作溶剂。
1.2.5 金属元素的测定。
1.2.5.1 仪器工作条件。
利用原子吸收分光光度计测定Cu、Pb、Cd元素含量，仪器参数见表1。原子荧光光度计测定Se元素的含量，仪器参数分别为总电流80 mA、屏蔽气流量800 mL/min、载气流量300 mL/min、原子化器高度8 mm、读数时间10 s-1。
1.2.5.2 标准曲线的制备。
参照文献[15]，按梯度配制各元素的标准溶液，再按“1.2.3.1”中的条件进行标准曲线的绘制，并得到相应的回归方程，各线性回归方程见表2。
1.2.5.3 样品处理及测定。
参照文献[16]，称取一定量各样品粉末于消解罐中，加入6 mL硝酸，混匀后置于120 ℃电热板上预消解30 min，然后置于微波消解仪中进行程序消解，消解完成后再用配套的赶酸装置进行赶酸，用超纯水溶解并定容至25 mL，再按“1.2.3.1”中的条件进行测定。
2 结果与分析
2.1 多糖含量
由表3所示，不同产地的多花黄精多糖含量存在一定差异。江西宜春的多花黄精多糖含量最高，为14.77%，湖南湘西的多花黄精多糖含量最低，为2.66%。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为0.44%、1.15%、1.98%;加标回收率为98.9%，RSD为1.25%。2015版《中国药典》将黄精多糖作为黄精含量测定质量标准，以无水葡萄糖计，不得低于7%[17]。表3中湖南湘西的多花黄精及湖北恩施的多花黄精多糖含量均低于7%，其原因与样品采摘的季节及生长年限有关，不同季节采摘，多糖含量存在一定的差异，生长年限越长黄精多糖含量越高[18-19]。
2.2 黄酮含量
由表3所示，不同产地多花黄精黄酮含量存在一定差异。湖南张家界的多花黄精黄酮含量最高，为（1.09±0.04）mg/g，广西桂林的多花黄精黄酮含量最低，为（0.35±0.02）mg/g。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为0.76%、1.54%、1.36%;加标回收率为95.7%，RSD为1.46%。
2.3 多酚含量
由表3所示，不同产地多花黄精多酚含量存在一定差异。四川广安的多花黄精多酚含量最高，为（1.45±0.02）mg/g，江西宜春的多花黄精多酚含量最低，为（0.47±0.01）mg/g。方法学考察结果表明，稳定性试验、重复性试验和精密度试验的RSD分别为1.02%、1.76%、1.59%;加标回收率为97.4%，RSD为1.03%。
2.4 浸出物含量
由表3所示，不同产地多花黄精浸出物含量存在一定差异。湖南张家界的多花黄精浸出物含量最高，为74.51%，四川广安的多花黄精浸出物含量最低，为57.03%。
2.5 金属元素含量
由表3所示，不同产地多花黄精中的同种元素含量具有一定的差异。Cu、Se含量最高的分别为广东清远的多花黄精（1.785 9 μg/g）、江西宜春的多花黄精（77.99 ng/g）;Pb、Cd含量最高的分别为广东清远的多花黄精（2.469 4 μg/g）、广西桂林的多花黄精（0.263 7 μg/g），但均低于国家的限量标准，不存在重金属超标问题。微量元素含量存在差异与当地土壤环境有关，江西宜春、湖北恩施均是以富硒享誉全国，所以江西宜春的多花黄精及湖北恩施的多花黄精中Se含量高于其他产地的多花黄精。 利用加标回收试验来评价试验结果的准确度，结果见表4。由表4可知，试验加标回收率为95.8%～102.6%，RSD为1.7%～2.3%，表明试验方法准确性高。
3 结论
不同产地的多花黄精中多糖、黄酮、多酚、浸出物以及金属元素含量存在差异，与所处的地理环境、采收季节、生长年限等因素存在一定的关系。以多糖、Se含量为评价指标，则江西宜春的多花黄精为最优;以黄酮、浸出物为评价指标，则湖南张家界的多花黄精为最优;以多酚含量为评价指标，则四川广安的多花黄精为最优。由此可知，评价中药材质量不能从单一的化学成分，需要综合多种化学成分来考虑。
参考文献
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