【摘 要】
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目的:探讨川皮苷对缺氧复氧(H/R)诱导的大鼠心肌损伤细胞发挥保护作用的潜在机制.方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,CCK-8法检测不同剂量(0,12.5,25,50,100,200μmol·L-1)的川皮苷作用于H9c2细胞48 h后的细胞活力,筛选合适的实验浓度;取对数生长期的H9c2细胞,随机分为对照组、H/R组、mimic-NC组、miR-145-5p mimic组、川皮苷低(12.5μmol·L-1)、高(25μmol·L-1)剂量组、川皮苷+inhibitor-NC组、川皮苷+miR-145
【机 构】
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同济大学附属上海市第四人民医院 上海200434;苏州大学附属第一医院
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目的:探讨川皮苷对缺氧复氧(H/R)诱导的大鼠心肌损伤细胞发挥保护作用的潜在机制.方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,CCK-8法检测不同剂量(0,12.5,25,50,100,200μmol·L-1)的川皮苷作用于H9c2细胞48 h后的细胞活力,筛选合适的实验浓度;取对数生长期的H9c2细胞,随机分为对照组、H/R组、mimic-NC组、miR-145-5p mimic组、川皮苷低(12.5μmol·L-1)、高(25μmol·L-1)剂量组、川皮苷+inhibitor-NC组、川皮苷+miR-145-5p inhibitor组,除对照组外,其余组建立H/R损伤模型.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-145-5p和Krüppel样因子5(KLF5)mRNA的表达水平;CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;并检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白印迹法(Western Blot)检测细胞KLF5、核因子-κB p65(NF-κB p65)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达.结果:12.5和25μmol·L-1的川皮苷对H9c2细胞的活力未出现明显影响,当川皮苷浓度大于50μmol·L-1时可显著抑制H9c2细胞的活力(P<0.05).因此,选择12.5和25μmol·L-1的川皮苷用于后续实验.川皮苷可促进miR-145-5p表达,下调KLF5表达(P<0.05),升高H9c2细胞活力、SOD水平和Bcl-2蛋白表达(P<0.05),降低细胞凋亡率、LDH、CK-MB、MDA、TNF-α、IL-1β水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值及Bax蛋白表达(P<0.05).上调miR-145-5p表达与川皮苷发挥相同的作用,下调miR-145-5p后,川皮苷对H9c2细胞损伤的保护作用被明显削弱.结论:川皮苷可能通过上调miRNA-145-5p,抑制KLF5的表达和NF-κB p65的活化,进而抑制氧化应激和炎症反应,减少H/R诱导的心肌细胞凋亡.
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