海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因克隆表达及发酵条件优化

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目的从嗜热微生物海栖热袍菌中克隆磷酸戊糖变位酶基因,实现其在大肠杆菌中的表达。方法以海栖热袍菌基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得编码磷酸戊糖变位酶蛋白基因(ppm),连接到具有T7强启动子的pET-32a质粒中,构建重组工程菌E.coliBL21(DE3){pET-32a.Tmppm}。通过Plackett.Burman设计、最陡爬坡试验和Box—Behnken试验方法优化工程菌发酵条件,构建回归方程。结果双酶切鉴定、测序分析和十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS.PAGE)证实海栖热袍菌磷
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