替考拉宁产生菌的诱变选育

来源 :名城绘 | 被引量 : 0次 | 上传用户:killer258
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
   摘要:目的:本文对替考拉宁产生菌进行了诱变选育,以期获得替考拉宁高产菌株。方法:通过在固体培养基中添加不同浓度替考拉宁筛选耐自身抗性菌株,再结合紫外诱变加氯化锂的方法,筛选出高产替考拉宁菌株。结论:在研究过程中通过耐自身抗性结合诱变选育,筛选出了替考拉宁高产菌,使发酵单位提高48.5%。
   关键词:替考拉宁产生菌;抗性选育;紫外诱变加氯化锂
  
   替考拉宁,别称肽可霉素,是一种糖肽类抗生素,主要由游动放线菌产生。替考拉宁可以应用在多重耐药菌感染治疗方面。通过相关研究表明,替考拉宁不仅可以消灭革兰氏阳性菌,而且对多重耐药的肠球菌、金黄色葡萄球菌具有明显的抗菌活性。在治疗金黄色葡萄球菌时,普遍应用万古霉素;但随着替考拉宁作用的不断挖掘,替考拉宁在金黄色葡萄球菌的治疗方面得到了广泛应用。现阶段金黄色葡萄球菌问题日益突出,替考拉宁、万古霉素的需求量日益增加。与替考拉宁相比,万古霉素的毒副作用相对较高,在体内的半衰期较短,因此替考拉宁在治疗金黄色葡萄球菌方面更具优势。为了将替考拉宁的作用充分发挥,需要提高替考拉宁的产量,因此相关学者在替考拉宁产量方面进行了大量研究。本项研究通过添加不同浓度替考拉宁筛选耐自身抗性菌株,再结合紫外诱变加氯化锂的方法,筛选出高产替考拉宁菌株。
   1材料与方法
   1.1材料
   1.1.1菌株
   替考游动放线菌T16-4-18,该菌株由华北制药华胜有限公司研发试验室编号并保藏。
   1.1.2培养基组分
   (1)固体培养基及斜面培养基:FeSO4·7H2O0.04g/L、葡萄糖1.0g/L、酵母粉2.0g/L、MgSO4·7H2O0.6g/L、KCI6.0g/L、K2HPO41.0g/L、PH7.0~7.2。
   (2)种子培养基:蛋白胨2.0g/L、糊精4.0g/L、可溶性淀粉24g/L、CaCO32.0g/L、酵母粉6.0g/L、PH7.0~7.2。
   (3)发酵培养基:玉米浆16g/L、糊精12g/L、可溶性淀粉20g/L、CaCO32.0g/L、黄豆粉24g/L、PH6.8~7.0。
   1.1.3试剂
   替考拉宁(本公司自制粗粉),氯化锂购自天津科密欧化学试剂有限公司。
   1.2方法
   1.2.1替考拉宁在自身抑制方面的情况
   1.2.1.1将替考拉宁配置成不同濃度的溶液,经过滤除菌,将其涂布在固体平板培养基上。在含有不同浓度的替考拉宁产品的平板培养基上涂布未经处理的替考拉宁孢子悬液,28℃培养;培养过程中对孢子的生长情况进行密切观察。
   1.2.2抗性菌株的选育
   无菌落生长的平板所含替考拉宁浓度即为最小抑菌浓度,在含有最小抑菌浓度替考拉宁的平板培养基上涂布菌株T16-4-18孢子悬液,筛选出存在抗性突变的菌株。
   1.2.3紫外诱变结合氯化锂进行诱变选育
   1.2.3.1将氯化锂加入到灭菌后的固体培养基中,摇匀倒碟子,保证每个平板含有0.5%氯化锂。
   1.2.3.2取新鲜斜面1支,加入无菌纯化水后刮下,用玻璃珠打碎10min,制备成孢子液。将孢子液UV照射100s,将照射后的孢子液稀释到-2、-3、-4,在红光下分别涂布到含有0.5%氯化锂的平板上;未经照射的孢子液(自然分离)稀释到-4、-5、-6进行涂布。
   1.2.3.3平板培养成熟后,挑选一定数量单菌落接种斜面,培养后接种摇瓶和发酵瓶,测定发酵瓶效价。
   2结果与分析
   2.1替考拉宁在自身抑制方面的情况
   研究人员配置相应浓度的替考拉宁成品溶液,使用相应的方法进行过滤除菌,研究人员将处理过后的替考拉宁成品溶液与未经处理的替考拉宁成品溶液分别涂布在不同的平皿上,并对菌落的生长情况进行观察。研究人员发现,随着替考拉宁浓度的不断增加,孢子生长的时间逐渐延长,并且生长速度逐渐放缓,当涂布有0.012g替考拉宁时,孢子几乎不会生长。
   研究人员为了更好的分析在替考拉宁产生菌的发酵过程中,是否自身代谢产物会对发酵过程产生抑制,在接种时将0-30mg/L的替考拉宁成品加入到发酵液当中,在发酵培养8天之后,对其效价进行测定。当替考拉宁的添加浓度控制在5mg/L至15mg/L之间时,替考拉宁的效价呈现增长的状态,但是增长相对缓慢;如果添加浓度为20mg/L,替考拉宁的效价会逐渐下降;如果添加浓度在30mg/L,替考拉宁的效价会受到严重的影响。
   2.2抗性菌株的选育
   菌悬液经紫外线照射600s,暗培养2小时,将其在含有0.012g替考拉宁的平板上进行涂布,28℃培养。挑选出相应数量的菌落接种斜面,对其发酵水平进行对比分析。通过筛选获得了具有较高生产能力的菌株,编号T-18-043,其发酵效价比出发菌株提高21.2%。
   2.3紫外诱变结合氯化锂进行诱变选育
   将通过抗性选育出的菌株TC-18-043制备成孢子液,UV照射100s后涂布在含有0.5%氯化锂的平板上,28℃培养。平板培养成熟后挑选出相应数量的菌落接种斜面,并进行发酵效价测定。UV结合氯化锂复合诱变致死率为90%,通过复合诱变选育出高产菌株TC-18-192,发酵效价比出发菌株提高22.5%,比原始菌株提高48.5%。
   3讨论
   对于抗生素产生菌而言,其对自身所产抗生素的耐受能力有所不同,低产菌株的耐受能力相对较差,高产菌株的耐受能力相对较好。本项研究对替考拉宁产生菌的抗性进行筛选,在筛选的过程中利用紫外诱变,从而筛选出了高产菌株T-18-043,使替考拉宁效价提高21.2%。将选育出的高产菌株T-18-043再进行紫外诱变,涂布在含有氯化锂的平板上,筛选出高产菌株TC-18-192,发酵效价比出发菌株提高22.5%。综上,通过对原始菌株T16-4-18进行抗性筛选后,再进行紫外诱变结合氯化锂的方法进行选育,得到高产菌株比原始菌株效价提高48.5%。
   徐波等研究人员利用其它技术筛选出了可以将替考拉宁产量提高65%以上的融合菌株。在以后的工作中会继续对菌种进行筛选,并不断尝试新型的选育方法,通过这样的方式将替考拉宁的耐受性逐步提高。希望通过本项研究,可以为相关人员的后续研究提供借鉴。
   参考文献:
   [1]白芳静, 左良成, 尤春静,等. 替考拉宁产生菌耐自身抗性变株的选育[J]. 畜牧与饲料科学, 2015(7):98-99.
   [2]吴军营, 张永红, 田雪虹,等. 替考拉宁产生菌醋酸钠抗性变株的选育[J]. 河北化工, 2012(5):31-31.
   [3]金志华, 王明蓉. 替考拉宁产生菌TA2—2组分高含量菌种的推理选育[J]. 中国抗生素杂志, 2010, 25(2):94-96.
   (作者单位:华北制药华胜有限公司)
其他文献
转炉气化系统概述   邯钢邯宝炼钢厂汽化烟道位于转炉的正上方,长期处于高温、高压、多尘、温度频繁波动的复杂环境,它的使用寿命受多种复杂因素制约。有的烟道使用半年后就会出现漏水现象,有的甚至时间更短,直接影响着转炉的安全生产和生产节奏。   来自于软水站的一级脱盐水经过除氧器加热,水温由常温升高到144~159℃,压力0.3~0.5MPa(G),除氧水箱中的水分成两路,一路水经过低压强制循环泵送
期刊
摘要:伴随着国民经济的快速发展,我国电力工程迎来了十分良好的发展机遇,发展水平呈现出不断增长的趋势,且用户普及范围也在逐步扩大。面对着不同用电需求的电力用户,电力工程的建设要求也相应增多,而安全管理作为保障电力工程正常运行的基础措施,电力工程安全管理的整体水平也愈发重要与突出。基于对电力工程安全管理技术的分析,在详细阐述电力工程安全管理技术重要性及其存在问题的基础上,进行电力工程安全管理技术水平有
期刊
摘要:文章主要包括节段箱梁梁场加工区的设置,短线法预制施工工艺;同时阐述了该预制施工工艺对测量的要求。   关键词:节段箱梁;预制梁场;短线法      1、 工程概况   孟加拉快速公路项目位于首都达卡,本项目工作范围主要包括路面升级和扩宽以及快速公交道、快速公交站(含进站通道)和跨越桥的建设,桩号范围共两段,总长度共15.7km。该项目共有节段梁桥6座,共有6孔914片梁,节段梁分段长
期刊
摘要:随着经济社会的快速发展,无论是企业还是个人,对电能都有着越来越多的需求。因此,做好用电检查工作,提高用电检查的效率,不仅能够保证用户的用电安全,更能够提高用电效率,节约电能。而目前提高用电检查效率在最有效的办法则是将新技术应用于用电检查之中。把该文将对用电检查中应用新技术的必要性以及实践过程进行论述,希望能为各位同行提供参考。   关键词:用电检查;技术应用;应用分析      1用电
期刊
摘要:随着我国社会经济的快速发展及城市化步伐的加快,市政工程的数量以及规模都有了明显的增长,电气工程设计作为市政工程中重要的组成部分,其设计的质量和有效性会在一定程度上决定市政工程的质量。本文对建筑电气施工图设计中的易错问题进行了归纳总结,剖析了这些问题的症结所在,并有针对性地提出了改进措施。   关键词:市政电气设计;问题;措施      一、市政工程与电气设计之间的联系   在进行市
期刊
摘要:在当今时代,大数据信息化的发展为许多行业和人们的生活带来了极大的便利,但同时也带来了重大挑战。在大数据信息化的时代,可以保存和获取越来越多的档案数据,但从分析和保存的角度来看,它变得更加困难,并且由于技术的不断更新,电子档案所具有凭证和安全特性就很难得到保证。文中分析了大数据时代的背景和电子档案理论,分析了大数据时代背景下电子档案管理的难点,并提出了相应的解决方案。   关键词:大数据;档
期刊
摘要:海绵城市是一种新型的城市发展方向,其建立能够在较大程度上减少由于降水、洪涝灾害等情况所造成的城市排水系统失控、水资源浪费,以及地下水不足的情况。本文针对在海绵城市中排水系统的施工要点展开分析与讨论。   关键词:海绵城市;排水系统建设;施工要点;方法措施      在城市的发展过程中,城市对灾难的抵御能力在很大方面影响城市的发展。且灾难的发生对城市中人们的生活也会造成比较大的麻烦以及财
期刊
摘要:轮缘润滑控制器是轮缘润滑系统的重要组成部分。为了有效降低车轮与轨道的磨耗,减少环境污染,CRH3型动车组轮缘润滑控制器设计了以时间控制为主,叠加弯道控制的喷油控制方案。本文主要介绍了CHR3型动车组轮缘润滑系统控制器的工作原理、喷油控制逻辑、监控内容等。   关键词:动车组、轮缘润滑、自动控制      随着中国高速铁路的飞速发展,动车组给人们带来了高效、舒适的交通体验,但高速也给轮缘
期刊
摘要:为了进一步满足我国城市居民的生活需求,我国的相关部门积极开展城市集中供热自动化系统的建设。但随着城市供热面积不断增多,原先依靠人力进行检测、调控、维护的供热管网管理体系已难以适应时代需求。供热管理环节事故频发,而供热管网调控、维护不及时也在一定程度上影响了城市供热质量与效益的充分发挥。本文对我国自动化集中供热系统的结构以及自动化供热系统所涉及的相关技术进行了分析,促进了我国集中供热自动化系统
期刊
摘要:压力容器是特种设备。根据工作压力、介质、工作环境和容积分级,不同类型的压力容器具有不同的设计、制造、安装、检验标准和操作规范。然而,新产业有其不同于旧产业的特点。该产品一般是在一个紧凑的生产周期中设计和制造的。如果集装箱制造单位对具体情况没有很好的了解,标准不够全面,就会导致在设计、制造、安装、使用集装箱时留下很多安全隐患。下面是对其工作特点的详细介绍,并对压力容器存在的问题进行探讨。  
期刊