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采用L16(4^5)正交设计方法探讨了酶解体系、酶解温度、酶解时间、菌龄、渗稳剂对血耳原生质体制备及其再生的影响。结果表明:静置培养5d菌丝体以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,采用1%溶壁酶+1%蜗牛酶,32℃酶解3h,制备率为2.950×10^7个/mL,其再生率可达4.508×10^-3。